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内毒素清除剂 使用说明

发表时间:2010-10-24  |  点击率:3978

 

内毒素清除剂
 

目录号
包装
价格
产地
 
50ml
Solarbio
 
100ml
Solarbio

 
产品简介:
本公司生产的内毒素清除剂主要用于清除DNA、蛋白质或其他液体样品中的内毒素。在特定的pH值、盐浓度和温度条件下,内毒素清除剂能与DNA、重组蛋白以及液体样品中的内毒素特异性结合,经过室温高速离心后,DNA或蛋白质等保留在水相,而内毒素则被浓缩到极小体积的下层相而被清除。经过3次以上重复抽提后可将活性为500050000 EU/ml的内毒素水平降低到50.5 EU/ml以下,即降低100010000倍。本试剂4℃可储存半年,-20℃长期储存。
 
操作步骤:
提取前请将内毒素清除剂放在冰上冰浴5min,期间翻转瓶子数次使试剂均匀预冷。
1a)已纯化的质粒DNA内毒素清除:吸取500μl DNA溶液于微型离心管,加入1/10体积3M NaAc pH5.21/20体积5M NaCl溶液,冰浴5min
   b)在提取质粒DNA过程中清除内毒素:以碱裂解法提取质粒为例,在加入裂解液和中和液并离心去除碎片之后,吸取含质粒DNA的上清于新离心管中,冰浴5min
2、加入1/5体积预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊。
3、冰浴5min,溶液应变清亮。
437℃水浴5min,不时振荡,溶液又变浑浊。
512000rpm室温离心5min,溶液应分为两相,上层水相含DNA,下层油状相含内毒素。
6、将含DNA的上层水相转移到新管,弃油状相,重复抽提三次,即重复步骤2-6三次。
7、加入2.5体积无水乙醇,-20℃沉淀30min或过夜;12000rpm离心10min,弃上清;70%乙醇洗涤沉淀,12000rpm离心5min弃上清;空气干燥沉淀,加入100200μl无内毒素的高纯水或TE溶解沉淀。
8、用内毒素检测试剂测定样品中内毒素活性,并与初始样品比较。
  
注意事项:
1DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于DNA和蛋白质本身的性质,清除程序可导致10-20DNA丢失,所幸的是与清除内毒素的艰难相比DNA更容易提取制备。
2、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压120℃高温处理。
 
内毒素简介:
内毒素(endotoxin)原称热原,是革兰氏阴性菌细胞壁外膜及其它微生物细胞壁的主要组成成分,其化学本质为脂多糖,主要由O-特异性链、核心多糖和类脂A三部分组成。脂多糖共价连接到非极性的疏水性类脂A(Lipid A)形成带负电荷的大分子,同时还具有一个亲水性的寡糖核,因而具有疏水和亲水双重性质。制备质粒DNA和重组蛋白时,细菌破壁之后将释放大量脂多糖。无论是普通制备纯化程序,还是离子交换、凝胶排阻过滤,甚至是氯化铯超速离心等制备程序,脂多糖任不可避免地与DNA或蛋白质牢固结合而被共同纯化。脂多糖具有强烈的免疫活性和细胞毒性,并能产生多种复杂的细胞生物学效应,大多数情况下会明显干扰并产生不可预测的实验结果。例如在DNA转染实验中,内毒素竞争性干扰转染试剂与DNA的结合,显著降低转染效率,并产生明显细胞毒性降低外源基因表达水平。

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