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QuickShuttle转染试剂 QuickShttleTM Transfection Reagents

发表时间:2010-11-21  |  点击率:1326

QuickShuttle转染试剂www.shsolarbio.com
QuickShttleTM Transfection Reagents
(#KX0110041,0.8 ml )
产品描述:
QuickShuttle是上海索莱宝生物科技有限公司新近研发的阳离子转染试剂,具有、低毒和易于使用等优点,推荐用于哺乳动物细胞和昆虫细胞的瞬时转染以及稳定细胞系构建,可以将转染实验操作缩短到一分钟即可完成。
重要提示:
1、以24孔细胞板转染实验为例,推荐一次(即每孔)转染实验的低内毒素质粒DNA用量为2ug,转染试剂用量为3-5ul(转染试剂的适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化,但理论上不超出3-5ul范围),转染实验中使用无菌生理盐水稀释质粒和转染试剂即可。
2、为获得高转染效率并尽可能降低细胞毒性,建议转染时细胞密度控制在50-80%范围内,而且在不影响转染效率的前提下,尽可能减少转染试剂的用量。
3、QuickShuttle转染试剂极大简化了转染步骤,转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育,可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血清和更换培养基。
4、如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,使用QuickShuttle进行转染实验可做进一步简化,即细胞传代后可直接进行转染实验,从而节省了18-24小时的转染前细胞培养时间。
5、QuickShuttle转染试剂建议储存温度为2-8℃,但在-30℃到室温范围内均可长时间稳定保存。
转染步骤:
下述所有实验步骤均针对哺乳动物贴壁细胞在24孔细胞板中的转染实验优化建立,不同细胞和不同培养基可能需要优化转染试剂的用量以获得佳实验效果。质粒DNA:请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,高压消毒或除菌过滤。
1.转染前18-24小时接种细胞到24孔细胞板中,每孔5-10*104细胞,1ml完全培养基。备注:如果筛选抗药性稳定细胞系,可以考虑简化的实验步骤,即在细胞传代后直接按下述步骤2-5进行转染实验,无需18-24小时的等候时间。
2.将2ug质粒DNA和3-5ul转染试剂分别稀释到50ul生理盐水中。备注:转染试剂的适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化,但理论上不超出3-5ul范围。
3.合并上述两溶液并混匀。备注:无需其他转染试剂所需的10-30分钟的等待时间。
4.将上述复合物直接加入到24孔细胞板中的细胞培养基中,轻摇细胞板以混匀。备注:转染复合物可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染实验。在极少情况下会出现贴壁细胞脱落现象,可先从待转染细胞孔中吸取500μl培养基与转染复合物预混后再加入细胞中;若在细胞瓶中进行转染,直接加入到无细胞贴壁的侧面并摇匀即可。
5.将细胞板移至37℃/5%CO2孵箱中进行培养。备注:无需在转染后4-6小时补加血清或更换培养基。
6.24-72小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。
附表:
培养器皿
表面积(cm2)
培养基用量(ml)
DNA用量(μg)/生理盐水用量(μl)
转染试剂用量(μl)/生理盐水用量(μl)
96孔板
0.4
0.2
0.4/25
0.8/25
24孔板
2
1
2/50
4/50
12孔板
4
1.5-2
4/50
8/50
6孔板(包括35mm培养皿)
9
2-3
8-10/100
16-20/100
60mm培养皿
27
6-8
20-25/200
40-50/200
25 cm2培养瓶
25
6-8
20-25/200
40-50/200
100mm培养皿
75
15-20
40-50/400
80-100/400
75 cm2培养瓶
75
20-25
40-50/400
80-100/400

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