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乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 常量可见分光光度法 说明 技术 文章

发表时间:2019-03-29  |  点击率:903
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乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)试剂盒

商品货号:QS1001
英文名称:Lacate Dehydrogenase(LDH)Assay Kit
别名:乳酸脱氢酶试剂盒 LDH Kit 乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1001-50管/24样 50管/24样¥170.00元 

 

  • 产品详细介绍
  •  
  • 产品说明书

 

测定意义:

LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

货号:QS1001                                                     规格:50管/24样

乳酸脱氢酶(Lactate DehydrogenaseLDH)试剂盒说明书

分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;

试剂一:液体15 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用,配好后-20 ℃保存,可保存两周,禁止反复冻融;

试剂三:液体15 mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:液体50 mL×1瓶,4℃保存;

操作步骤:

一、样品测定的准备:  

  1. 细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500-1000:1 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
  2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
  3. 血清(浆)样品:直接检测。

二、测定操作:

  1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至450nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

50

50

试剂一

250

250

试剂二

50

 

蒸馏水

 

50

充分混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴15min

试剂三

250

250

充分混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴15min

试剂四

750

750

充分混匀,室温静置3min,450 nm下测定吸光度,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。

LDH活力单位计算:

  1. 标准条件下测定的回归曲线, y = 0.725x (x为标准品浓度,μmol/mL;y为对吸光度)。
  2. 血清(浆)LDH活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH(U/mL)=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA

  1. 细胞、细菌和组织中LDH活力的计算
  1. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH(U/mg prot)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

  1. 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH(U/g鲜重)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W

  1. 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH(U/104 cell)= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W

V1:加入反应体系中样本的体积,0.05 mL;V2:加入提取液的体积,1 mL; T:反应时间,15 min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万。

 

辅酶Ⅰ系列    
QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
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MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   微量法100管/96样2500

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