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NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒 说明 技术文章
点击次数:661 发布时间:2019-06-10
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product-view

NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒

商品货号:QS1002
英文名称:NAD-Malate Dehydrogenase(NAD-MDH)Assay Kit
别名:NAD-苹果酸脱氢酶试剂盒 NAD-MDH Kit NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒 NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1002-50 管/48 样 50 管/48 样¥280.00元 

 

产品详细介绍

测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。

测定原理:

NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

 

产品说明书

货号:QS1002          规格:50 管/48 样

 

  NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)试剂盒说明书 紫外分光光度法

 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。 草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH 在细胞多种生理活动中 扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病 性等。根据不同的辅酶特异性,MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH,细菌中通常只 含有 NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。

测定原理:

NAD-MDH 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一: 提取液 60 mL×1 瓶,在 4℃保存;

试剂二: 液体 50 mL×1 瓶,在 4℃保存;

试剂三: 粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μ L 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四: 粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μ L 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

样本测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一), 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃ 离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

3、操作表:

试剂名称(μ L)测定孔
样本20
试剂二760
试剂三10
试剂四10

将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2,计算 ΔA=A1-A2。

注意:若 A1-A2 大于 0.5,需将样本用提取液稀释,使 A1-A2 小于 0.5,可提高检测灵敏度。 计算公式中乘以相应稀释倍数。

NAD-MDH 活力单位的计算:

1、血清(浆)NAD-MDH 活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷V 样÷T=6430×Δ A

2、组织、细菌或细胞中 NAD-MDH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH ( nmol/min/mg prot ) =[Δ A×V 反 总 ÷ ( ε ×d ) ×109 ]÷(V 样 ×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(W× V 样÷V 样总)÷T =6430×Δ A÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(2000×V 样÷V 样总) ÷T=3.215×ΔA

V 反总:反应体系总体积,8×10-4 L;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应 时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;2000:细胞或细菌总数,2000 万。 

 

系列产品及单价

辅酶Ⅰ系列    
QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
QS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法50管/24样170
MS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法100管/48样330
QS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   微量法100管/96样2500
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