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看完本篇你就知道什么是TEV重组型蛋白酶了

更新时间:2021-12-13  |  点击率:2765
  TEV重组型蛋白酶是使用基因工程表达和纯化后获得的,TEV蛋白酶特异性的识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly组成的七个氨基酸序列。
 
  与EK、SUMO 等蛋白酶相比,具有高活性和高特异性的特点,TEV蛋白酶经 6×His 标签纯化获得(含组胺酸标签),其纯度高达99%;该酶剪切反应完成后,可通过His标签纯化树脂Ni-NTA Resin去除,从而达到纯化目的蛋白的目的。在4-30℃、pH 6.0-8.5反应条件下均具有活性,相对反应条件比较宽松。
 
  蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶,是酶学研究中较早也是最深入的一种酶。
 
  TEV重组型蛋白酶(GST标签)是烟草花叶病毒小核体蛋白a催化结构域基因编码的经高度纯化的制剂,该酶的生物学功能是在病毒产生过程中将多蛋白体酶解为单一蛋白。
 
  和因子Xa、凝血酶相比,TEV酶是识别序列更加严格。做为生物工程下游技术中融合蛋白酶切使用的重要工具酶,TEV酶识别非常一致的7氨基酸序列:E-Xaa-Xaa-Y-Xaa-Q-P1’(G/S),酶切发生在Q和P1’之间的肽键。
 
  常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸,这样目标蛋白从融合蛋白的N端释放,带自然的N末端或者只多一个氨基酸的蛋白。
 
  该产品是经过了基因工程改造的蛋白酶,稳定性好,在广泛的温度范围具有特异性。本品来源于重组大肠杆菌,经过高度纯化,比活性达到10,000U/mg。
 
  最适酶切温度是30℃,但在4℃也具有酶活性。rTEV-H带His标签,酶切后可方便地通过谷胱甘肽亲和柱层析去除。酶切的条件比如:温度、pH、DTT等可根据具体蛋白进行优化。