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你知道什么是转染试剂么?一起来看看吧

更新时间:2022-07-05  |  点击率:1791
  转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。
 
  基因转染技术不仅是研究转基因和基因表达的重要工具,而且是目前基因治疗的关键步骤。理想的基因转染试剂应该具有如下特点:高效转染;安全;低细胞毒性;方法简单;省时、经济。
 
  哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。
 
  目前,将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类,即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染,以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。
 
  生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染的方式将外源DNA 导入到细胞中, 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统尤为常用。
 
  其中病毒载体的特点是整和效率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注射,不适合大量细胞研究的需要。
 
  磷酸钙在良好的转染条件下,可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题,非常不稳定,尤其受PH值的影响非常大,在实验中使用的每种试剂都必须小心校准,保证质量,因为甚至偏离*条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败,经常即使最熟练的转染实验者也不能保证磷酸钙转染的成功,他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。
 
  同时,他们还经常发现,往往小体积的转染比如6孔板以下的转染效果比较理想,可一换到大皿,经常转染效率下降很快。磷酸钙的先天缺陷往往是实验梗阻的主要原因。