柠檬酸合酶试剂盒基础介绍

　　一、柠檬酸合酶(CS)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是细胞内多种代谢途径的关键限速酶及代谢变化的标志酶，具有高度底物特异性，仅催化乙酰CoA和草酰乙酸缩合生成柠檬酸和辅酶A，作为三羧酸循环第一个限速酶，是该途径主要调控位点之一。柠檬酸合酶催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸，DTNB转变为黄色的TNB，产物在412nm处具有特征吸收峰，根据吸光值变化即可表征柠檬酸合酶的活性。
 

　　二、使用前每支加入500µL蒸馏水充分溶解(未使用完的试剂-20℃保存)；使用前每支加入1.5mL蒸馏水充分溶解(未使用完的试剂-20℃保存)。测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径10mm)、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
 

　　三、推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物CS活性，上清(胞浆提取物)和沉淀(线粒体)酶活之和即为总酶活；准确在10s和130s处完成读数，以保证实验结果的准确性；测定过程中待测样本和所有试剂须冰上放置，以免变性和失活；计算∆A测定=A2测定-A1测定，∆A对照=A2对照-A1对照，∆A=∆A测定-∆A对照。