电话咨询:
021-54100800
技术文章
当前位置:首页 > 技术文章 > Western Blot膜的选择

Western Blot膜的选择

发表时间:2012-04-20  |  点击率:4964

          Western Blot印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes,NC)和PVDF膜,此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。
选择的根据主要有:
a. 膜与目的蛋白分子的结合能力(也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量),以及膜的孔径(也就是拦截蛋白的大小);
b. 不影响后续的显色检测(也就是适和用于所选的显色方法,信噪比好);
c. 如果后继实验有其他要求,比如要做蛋白测序或者质谱分析,还要根据不同目的来挑选不同的转移膜。

NC膜的生产原理

匀浆配比

  购买回来的原料硝酸纤维素粒子是一种非常普遍的有机化学物,溶解形成混浆,在该浆体内,通过加入一定比例的试剂来调整后形成的膜的性质,一般主要包含表面活性剂/高分子聚合物/盐离子/成型剂等溶解的一个缓冲体系内。不同的厂家加入的溶液配方不一样,导致了产品的差异。

滚筒铺膜

  配好的匀浆通过滚筒,形成了一张薄膜,平摊在十分光滑的平面载体上。过程与造纸非常相似。

成型

  当匀浆内的成型剂开始挥发,膜逐步干燥成型。同时在这个过程中由于温度比较高,有些厂家在这个过程采取了在密闭腔体内成型,同时补充配方溶液的形式,来避免一些有效成分的蒸发。

切割

  通过以上步骤生产出来的膜是呈一个宽度极大的产品,宽度的大小直接和滚筒的大小相关,滚筒越大生产越方便,但设备的成本也越高.宽膜要经过切割才能成为我们购买到的25mm或18mm(或20mm)宽的膜,而长度上,成品卷膜和宽膜的长度是相同的.理论上可以让厂家切成你需要的任意宽度,但这样会造成原料的浪费和人力成本的增加,后来厂商在和试纸生产厂家的协调过程中,综合用料成本和生产便利性基本确定了上面说的宽度,以次为标准。

 

  从生产过程,我们可以得知,NC膜本身已经添加了表面活性剂来改善亲水能力,而且已经存在有一定的缓冲系统(虽然对纸条测试影响不会很大)。

 

PVDF膜

 
  PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜,小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支持物材料。
 
  分类
 
  1、水处理用PVDF膜,分为超滤膜和微滤膜两种,主要用于污水、海水淡化等的前处理,清除大分子、细菌、泥沙等杂志
 
  2、户外建筑用PVDF膜,主要用户户外建筑的玻璃、外墙、户外广告牌等的保护,主要是耐老化和耐磨功能
 
  3、电池用PVDF膜,包括在燃料电池和锂离子聚合物电池中的隔膜应用
 
  PVDF的主要性能:
 
  · 机械强度与坚韧度高
 
  · 防霉菌性
 
  · 高耐磨性
 
  · 对气体和液体的高耐渗透性
 
  · 耐热稳定性好
 
  · 阻燃,低烟
 
  · 温度提升过程中抗蠕变性好
 
  · 纯度高
 
  · 容易进行熔体加工
 
  · 耐对大多数化学品与溶剂
 
  · 兼有刚性的和柔韧的形态
 
  · 抗紫外线和核辐射性
 
  · 抗冲击性能
 
  · 耐候性
 
  · 耐低温达-40℃

联系我们

contact us

咨询电话

15021977219

扫一扫 微信咨询




扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站