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正确使用细胞培养器材的方法

发表时间:2012-05-09  |  点击率:2479

正确使用细胞培养器材的方法

一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗,然后用稀盐酸溶液(1%)浸泡过夜,再用自来水冲洗,后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤:
1)刷洗。用软毛刷和中性洗涤剂刷洗,去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力过重,以防损坏器皿内表面光洁度,影响细胞生长;也不能留有死角。器皿数量大时,可使用超声波清洁装置,冲洗干净后晾干。
2)清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配方如下,见下表:
   清洁液配方

 

    *

    

25%(弱液

50%(次强液

75%(强液

 重铬酸钾

1000g

1000g

1000g

 

2500mL

5000mL

7500ML

 蒸馏水或废液

7500Ml

5000mL

2500mL


该清洁液具有高度腐蚀性,操作时必须穿长筒胶靴,戴防酸橡皮手套,围裙和眼镜,以防清洁液溅出而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中,以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中,以防酸溅出。常用清洁液为75%50%两种。


将玻璃器皿放入时好装入塑料网袋内,再浸入清洁液中,玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12~24小时后取出。在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上,再用单蒸水冲洗三次以上,后用双蒸水(或去离子水)冲洗1~2次,晾干,包装杀菌。一般用121磅高压蒸气灭菌20分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水或去离子水抽滤冲洗、包装、121高压蒸气灭菌20分钟。也可用5%洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。


二、塑料器材
体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多,有进口的,也有国产的。主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。多数为进口产品,已消毒灭菌密封包装,使用时只需打开即可。有一次性使用的,也有反复使用的。在我国不少实验室,由于经费有限,经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。


塑料器皿若使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用3%HCl2%NaOH溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,或先用2%NaOH处理之后再用3%HCl浸泡30分钟,后用自来水冲洗干净,并用双蒸水冲洗3次以上,晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕,以免影响细胞的贴附性。所以,培养要求较高的细胞的塑料器材,好一次性使用。


三、橡皮器材
应选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品好是硅制品做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置的橡皮制品,用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,再用4%盐酸煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,单蒸水冲洗3次,双蒸水或去离子水冲洗一次,晾干后包装或置于铝盒内,用121高压蒸气灭菌20分钟。


已用过的橡皮制品,先用自来水冲洗干净,然后用洗衣粉加热煮沸10分钟后,用自来水边冲边用力搅动,以充分洗净残余洗衣粉,然后用蒸馏水煮沸2次,每次15分钟,再用单蒸水冲洗2次,必要时还要用双蒸水或去离子水冲洗一次,晾干后包装或放于铝盒内,用121高压蒸气灭菌20分钟。


四、金属器材
细胞培养中需用多种金属器材,用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等,常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟,擦干后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121高压蒸气灭菌20分钟。已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,包装入铝盒内于121高压蒸气灭菌20分钟。


五、其他物品
纱布先用自来水洗净后,再用单蒸水冲洗,然后用单蒸水煮沸2次,每次15分钟,并经常用长镊子翻动,再用单蒸水洗2次,晾干后折成八层包装,用121高压蒸气灭菌20分钟。


注射器的针头使用后,立即用自来水(或来苏尔水)冲洗数次,冲洗出针头内的剩余物,以免堵塞针头,然后用单蒸水洗2~3次,再用95%酒精冲洗3次,包装或置铝饭盒内121高压蒸气灭菌20分钟。


用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、缓冲液和酶滤液等也需要进行除菌处理。缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效,过滤时力量不能过大、过猛,以免滤膜破裂。滤液量多,用抽滤式或加压式(正压式)过滤装置。滤液量少,可选用2.5cm直径的小号滤器,直接套在小瓶(如青霉素瓶)上,以注射器推动压力过滤。


消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或部分包装,并用线绳扎紧。

 

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