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大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)酶联免疫分析(ELISA)

发表时间:2012-07-26  |  点击率:888

 大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称:
通用名:大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)酶联免疫分析试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)
含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)水平。用
纯化的大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗
的微孔中依次加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT),再与HRP 标记的卵磷脂胆固醇酰基转
移酶(LCAT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显
色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅
和样品中的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸
光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)浓度。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液30ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(360U/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在*、第二孔中分别加标
准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉,再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,
浓度分别为240 U/L,160 U/L ,80 U/L,40 U/L, 20U/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样
2
品终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
检测范围:
10U/L -300 U/L
规格:
96 人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月

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