多酚氧化酶(PPO)测试盒应该这样使用！

　　多酚氧化酶(PPO)测试盒的整个测试过程大约只需50分钟即可完成，并且一次可以测定约100例样本，大大提高了工作效率。每个样本仅需取100微升(ul)，减少了试剂消耗的同时降低了对珍贵样本的需求。试剂盒可以在2～8℃的条件下保存长达6个月仍然有效，保证了长期使用的可行性和数据的一致性。变异系数CV=1.7.表明该测试方法具有较高的重复性和可靠性，意味着不同批次间的实验结果较为一致。
 

　　由于采用了优化设计的试剂配方，使得检测限更低，同时背景干扰小，从而提高了检测的准确性；适用于多种类型的生物样本，包括组织、血清、血浆及相关液体样本，为科研工作者提供了便利。在生物学研究、食品工业等领域得到了广泛应用。它不仅简化了复杂的实验操作，提高了工作效率，而且确保了实验结果的准确性和可靠性。

 

　　多酚氧化酶(PPO)测试盒的测定步骤：
 

　　1.样品准备
 

　　-取材与研磨：选取新鲜的植物组织或其他含PPO的材料，迅速置于预冷的研钵中，加入适量的提取缓冲液(通常由试剂盒提供或按要求配制)，在低温环境下充分研磨成匀浆。注意尽量保持操作过程在冰上进行，以减少酶活性的损失。
 

　　-离心分离：将研磨好的匀浆转移到离心管中，使用台式离心机在一定转速下离心一定时间，使细胞碎片等杂质沉淀下来，得到上清液即为粗酶提取液。如果悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加二甲基亚砜(DMSO)。
 

　　2.反应体系构建
 

　　-添加底物和缓冲液：按照试剂盒说明书的要求，向比色皿或试管等反应容器中依次加入特定的底物(如邻苯二酚)、适量的反应缓冲液以及一定量的粗酶提取液。不同品牌的测试盒可能会有不同的配方和用量要求，需严格按照说明操作。
 

　　-混匀并保温：轻轻混匀反应体系中的各种成分，然后将反应容器放置在适宜的温度条件下(一般为室温或特定的恒温水浴锅中)进行保温孵育，让酶与底物充分接触并发生反应。
 

　　3.吸光度测定
 

　　-选择波长：根据该测试盒的原理，PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm处有特征光吸收。使用可见分光光度计在此波长下测量反应体系的吸光度值。
 

　　-定时读数：在规定的时间节点(通常是每隔一段时间)读取一次吸光度值，记录数据。通过测量单位时间内吸光度的变化量来计算PPO的活性。
 

　　4.数据处理与分析
 

　　-绘制标准曲线(若有对照品)：如果试剂盒配备了已知浓度的标准品，可根据标准品测得的数据绘制标准曲线，然后根据样品的吸光度值从标准曲线上查出对应的酶活性单位。
 

　　-计算结果：根据公式和所测得的数据计算出样品中PPO的活性，并对结果进行分析和比较。