革兰氏染色液试剂盒的使用步骤

革兰氏染色液试剂盒是微生物学实验室的基础工具，用于通过细胞壁结构差异区分革兰氏阳性（G⁺）和阴性（G⁻）细菌，是细菌分类鉴定的重要步骤。

革兰氏染色液试剂盒的使用步骤：

1、涂片固定：菌液涂片后火焰固定（1-2次），避免过热破坏细胞结构。

2、初染：滴加结晶紫染色液，染色1分钟，水洗。

3、媒染：滴加碘液，染色1分钟，水洗。

4、脱色：滴加脱色液，摇动玻片10-60秒（根据涂片厚度调整），至无紫色脱落，水洗。

5、复染：滴加沙黄染色液，染色1分钟，水洗后晾干或吸干水分。

6、镜检：100倍油镜观察，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色。

关键控制点：

脱色程度：过度脱色可能导致阳性菌误染为阴性菌，脱色不足则阴性菌可能呈紫色。

菌龄影响：阳性菌培养时间过长或死亡后，细胞壁结构破坏，可能呈阴性反应。使用注意事项：

1、脱色时间是实验成败的关键，过短会导致假阳性，过长则会导致假阴性。

2、涂片需均匀、薄厚适中，太厚会影响脱色和观察。