干货分享—常用的细胞凋亡检测方法汇总(二)

常用的细胞凋亡

检测方法汇总（二）

细胞凋亡检测对探究相关机制意义重大，本文主要介绍DNA片段化、线粒体及溶酶体检测三个方面。细胞凋亡时，染色质DNA会规律性断裂，形成180-200bp整数倍的寡核苷酸片段。通过琼脂糖凝胶电泳能观察到 “梯状" 条带，TUNEL法可标记断裂DNA末端，实现高灵敏度检测及细胞定位。线粒体在凋亡调控中作用关键，凋亡时膜电位改变，使用JC-1等荧光探针，依据荧光强度变化可知线粒体功能状态。溶酶体检测可利用溶酶体荧光探针，其荧光特性会随溶酶体膜通透性改变而变化；检测溶酶体相关酶如组织蛋白酶的活性，同样能反映细胞凋亡情况。这些方法从不同层面助力细胞凋亡研究。

本文分享了常见的几种细胞凋亡检测方法，让我们一起学习一下吧~

01

DNA片段化

细胞凋亡晚期，细胞核碎裂呈现片段化的DNA。荧光/生物素标记的dUTP在TdT酶的介导下与碎片化DNA暴露的-3'OH末端结合，原位检测晚期凋亡特征。

02

线粒体检测

在细胞凋亡过程中，线粒体膜通透性转换孔MPTP过度开放，线粒体跨膜电位降低，还会导致一些相关的促凋亡因子，如cytochrome c、AIF、Bcl-2家族以及pro-caspase等从线粒体释放到胞质中；同时线粒体内的Bcl-2家族对细胞凋亡具有双向调节作用。线粒体膜通透性发生改变时，其跨膜电位降低，细胞进入不可逆的凋亡过程。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

03

溶酶体检测

在特定条件下，包括活性氧、鞘氨醇、细胞凋亡效应因子Bax等在内的多种刺激因子均可诱发溶酶体膜通透性的改变，之后溶酶体内含的蛋白酶(如组织蛋白酶等)及其他水解酶从溶酶体释放至胞浆中，通过剪切效应分子，激活包括凋亡酶在内的其他水解酶而启动细胞凋亡程序的执行。关于