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Western Blot中常见问题解决方案

发表时间:2013-01-10  |  点击率:3645

  

Western Blot中常见问题解决方案
 
WB*步:组织或细胞蛋白提取
蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏,因此,根据标本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的!明睿生物综合多家生产商之优势,提供各种蛋白标本制备试剂盒:
全细胞蛋白分离:该试剂盒提供细胞裂解液、蛋白酶抑制剂和DTT,可在非变性条件下从哺乳动物细胞和组织中提取全细胞蛋白。操作简单、快速,整个过程不超过20分钟,且不使用有毒物质。所得蛋白能保持原来的活性,可以用于多种下游分析,如:酶活性分析、WB等。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Biovision
K269-500
Mammalian Cell Extraction Kit
500 assays
2812
Millipore
2910
WHOLE CELL EXTRACTION KIT
100 assays
1368
CST
9803
Cell Lysis Buffer (10X)
15 ml
623
CST
9806
RIPA Buffer (10X)
15 ml
623
 
线粒体/细胞浆蛋白分离:该试剂盒提供独特的试剂可以从多种哺乳动物细胞(包括凋亡和非凋亡细胞)中分离出线粒体部分和胞浆部分,得到的蛋白保持了原有的生物学活性,可直接用于分析线粒体组分在胞浆和线粒体中分布的变化,如:WB、Elisa等。操作过程简单、方便,不使用有毒的物质,无需超速离心。该试剂盒也可用于分离完整的线粒体架构。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Biovision
K256-100
Mitochondria/Cytosol Fractionation Kit
100 assays
4028
Biovision
K256-25
Mitochondria/Cytosol Fractionation Kit
25 assays
1900
CST
9852
Chaps Cell Extract Buffer (10X)
5 ml
623
 
细胞核/细胞浆蛋白分离试剂盒:该试剂盒提供完整的系统,可从哺乳动物细胞和组织中分离细胞浆和细胞核蛋白,与其他同类试剂盒不同的是,该系统在分离过程中保持胞浆和胞核的完整,从而小程度的避免交叉污染。所得到的胞浆/胞核蛋白保持原有的活性,可用于下游分析,如:转录因子活性分析、CHIP分析、WB分析、EMSA分析、酶活性分析等。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Biovision
K266-100
Nuclear/Cytosol Fractionation Kit
100 assays
4028
Biovision
K266-25
Nuclear/Cytosol Fractionation Kit
25 assays
1900
 
细胞颗粒/细胞浆蛋白分离试剂盒:该试剂盒使用物理学的方法和独特的试剂,快速的将细胞浆蛋白和细胞颗粒分开,从而避免了传统分离方法所致两组份间,尤其是小分子物质的相互扩散和交叉污染现象。从而可以准确地进行目的分子的亚细胞定位研究。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Biovision
K267-50
Cytosol/Particulate Separation Kit
50 assays
3724
 
细胞膜蛋白分离试剂盒:该试剂盒提供独特的组份和优化的缓冲液,可以的从哺乳动物细胞和组织中分离分离细胞膜蛋白。与其他同类产品不同的是,该试剂盒不仅可以分离总的细胞膜蛋白(胞浆膜蛋白和细胞器膜蛋白),还可以特异性的分离高纯度的胞浆膜蛋白,纯度可以达到90%以上。得到的膜蛋白保持了原有的生物学活性,可以直接用于下游分析,如WB,2-D电泳,酶分析等。操作简单,快速,整个过程只需要不到一个消失。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Biovision
K268-50
Membrane Protein Extraction Kit
50 assays
4028
 
亚细胞结构蛋白分离:该试剂盒可以同时从一个细胞或者组织标本中,分离细胞浆、细胞核、细胞膜和细胞骨架蛋白四种亚细胞结构蛋白。操作过程简单,快速,不超过两个小时。而且无需超速离心,不使用有毒物质。所得到的蛋白保持了原有的生物学活性,可直接用于多种下游分析,如:B,1-D或者2-D电泳,凝胶迁移实验和酶活性分析等。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Biovision
K270-50
FractionPREP Cell Fractionation Kit
50 assays
5700
Millipore
2145
COMPARTMENT PROTEIN EXTRRACTION KIT
1Kit
4788
石蜡包埋组织蛋白提取:该试剂盒使用的LiquidTissue@is 技术和试剂,专为直接从福尔马林固定,石蜡包埋组织(FFPE)中提取蛋白而设计,使得对于该类标本的检测不再局限于IHC的方法。提取的蛋白可直接用于膜检测分析或芯片检测,尤其适用于蛋白质组学分析。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
KPL
554-00-02
PROTEOSOL TIS EX SYS,10AP
10 reactions
8316
 
WB第二步:电泳,转膜
蛋白质Marker是检测电泳效果和确定待测靶蛋白分子量大小和正确与否的保证!
预染蛋白Marker:实时监测电泳和监测过程,可直接观察到目的蛋白的大小。但是不能曝光到胶片上。
供货商
产品编号
产品名称
规格
范围
报价
MBI
SM0671
PageRuler™ Prestained Protein Ladder
2x250µl
10-170kDa
870
MBI
SM0441
Prestained Protein Molecular Weight Marker
2x250µl
20-120kDa
400
MBI
SM1811
PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder
2x250µl
11-250kDa
1100
非预染蛋白Marker:需要染色后才能观察到条带的大小。
供货商
产品编号
产品名称
规格
范围
报价
MBI
SM0431
Unstained Protein Molecular Weight Marker
2x1000µl
14.4-116kDa
400
MBI
SM0661
PageRuler™ Unstained Protein Ladder
2x250µl
10-200kDa
500
 
生物素标记的蛋白Marker:
提供由十种生物素化重组蛋白混合组成的蛋白Marker及HRP标记的抗生物素抗体,可用于辣根过氧化物酶显色系统的WB检测。尤其适用于化学发光检测,可直接在胶片上显示Marker条带,更直接看到目的蛋白的大小。
供货商
产品编号
产品名称
规格
范围
报价
CST
7727L
Biotinylated Protein Ladder Detection Pack
325 mini-blots
10-200kDa
2492
CST
7727S
Biotinylated Protein Ladder Detection Pack
65 mini-blots
10-200kDa
623
其他电泳、转膜相关产品
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
KPL
60-00-50
BIODYNE B MEMBRANE,(20CMX1M),1 ROLL
1 roll (20 cm x 1 m)
2472
MBI
R0891
Protein Loading Buffer Pack
1pack
370
MBI
R1011
DualColor™ Protein Loading Buffer Pack
1pack
400
CST
7722
Blue Loading Buffer Pack
1 Pack
187
CST
7723
Red Loading Buffer Pack
1 Pack
187
 
WB第三步:加入一抗solarbio抗体应有尽有!
Abcam:大的互联网抗体王国,提供的不仅仅是抗体,还有抗体相关的一切!
Chemicon:干细胞和神经生物学抗体的!
CST:信号转导/磷酸化抗体的聚集地!
Calbiochem:WB*抗体的集大成者!
NeoMarkers:上万种抗体,大中小包装,满足您各种需要!
R&D:细胞因子抗体的佳选择!
Upstate信号转导的强者,磷酸酪氨酸抗体的金标准!
Zymed:病理学抗体的!
 
内参的使用------WB过程检测以及目的蛋白定量的标准!
WB常用内参及其技术参数
内参名称
分子量大小
适用范围
Beta-actin
43kDa
胞浆和全细胞
GAPDH
30-40kDa
胞浆和全细胞
Tubulin
55kDa
胞浆和全细胞
VCDA/Porin
31kDa
线粒体
COXIV
16kDa
线粒体
TBP
38kDa
细胞核
 
进口分装内参,现货供应!
产品编号
产品名称
规格
报价
M610
Mouse monoclonal [AC-15] to beta Actin
10 ul
350
M611
rabbit polyclonal to beta-actin
20 ul
350
M620
Rabbit polyclonal to GAPDH
10 ul
350
M621
Mouse monoclonal [mAbcam 9484] to GAPDH
20 ul
350
更多产品和技术资料, 
WB第四步:加入二抗:
solarbio提供各种种属、各种亚型、各种标记的二抗!
KPL:进口的抗体,国产的价格,优越的品质,是您的选择!
SBA:稳定的质量,格式的包装和价格,没有不选择的理由!
更有进口分装产品
二抗产品列表:
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
KPL
04-18-06
HRP,GT ANTI-MS,IGG(H+L),0.1MG
0.1 mg
393
KPL
074-1806
HRP,GT ANTI-MS,IGG(H+L),1.0MG
1.0 mg
752
KPL
04-15-06
HRP,GT ANTI-RB,IGG(H+L),0.1MG
0.1 mg
393
KPL
074-1506
HRP,GT ANTI-RB,IGG(H+L),1.0MG
1.0 mg
781
KPL
14-13-06
HRP,RB ANTI-GT,IGG(H+L),0.5MG
0.5 mg
584
 
SB100
HRP, Goat anti-Mouse, IgG(H+L)
0.1 mg
200
 
SB200
HRP, Goat anti-Rabbit, IgG(H+L)
0.1 mg
200
 
SB300
HRP, Rabbit anti-Goat, IgG(H+L)
0.1 mg
200
更多产品信息请咨询上海索莱宝生物公司
 
WB第五步:结果检测
化学发光法or显色法,应有尽有!
化学发光法(ECL)
辣根过氧化物酶(HRP)系统:
供货商
产品编号
产品名称
规格
使用膜面积
报价
KPL
54-12-50
KIT,PROT DETEC,WB,HRP,MS+RB,LUMI
2500 cm2
2500 cm2
4391
KPL
54-61-00
KIT,LUMIGLO«,A&B,2X120ML
240 mL
2400 cm2
1766
KPL
54-61-01
KIT,LUMIGLO«,A&B,6X120ML
720 mL
7200 cm2
3761
KPL
54-61-02
KIT,LUMIGLO«,A&B,2X30ML
60 mL
600 cm2
691
KPL
54-13-50
KIT,PRDECT,LUMI RESERVE  WB,2400CM2
2400 cm2
2400 cm2
7831
KPL
54-71-00
KIT,LUMIGLO RESERVE CHEMI,2400CM2
2400 cm2
2400 cm2
6359
KPL
54-71-01
KIT,LUMIGLO RESERVE CHEMI,600CM2
600 cm2
600 cm2
2384
Amersham
RPN2109
ECL™ Western Blotting Detection Reagents
1000 cm2
1000 cm2
1955
Amersham
RPN2134
ECL™ Western Blotting Detection Reagents
6000 cm2
6000 cm2
5716
碱性磷酸酶(AP)系统
具有以下优点:
灵敏度高:可检测到fg级检测的蛋白
发光时间长:发光时间长达5天,允许反复曝光(WB)和读数(Elisa)
操作简单:单组份试剂即用型,只需加到杂交膜或96孔板中检测即可
保存时间长:4度可稳定保存2年
灵活:适用于胶片曝光或者仪器成像分析
经济:用量少,并可节省其它试剂
相关产品信息
供货商
产品编号
产品名称
规格
使用膜面积
报价
KPL
55-60-01
PHOSPHAGLO RESERVE AP SUB,30ML
30 mL
600 cm2
1670
KPL
55-60-02
PHOSPHAGLO RESERVE AP SUB,100ML
100 mL
2000 cm2
4754
KPL
55-60-03
PHOSPHAGLO AP SUBSTRATE, 30ML
30 mL
600 cm2
1193
KPL
55-60-04
PHOSPHAGLO AP SUBSTRATE,100ML
100 mL
2000 cm2
3198
 
显色法:操作简单、无需暗室等曝光设备。KPL提供专门针对WB优化的底物,保证高的灵敏度和低的背景。
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
KPL
50-77-00
KIT,TMB MB SUBSTRATE,440ML
440 mL
1342
KPL
50-77-01
SOLN,TMB MB,ENHANCER,40ML
40 mL
464
KPL
50-77-03
KIT,TMB 1-C MB,2X100ML
200 mL
1037
KPL
50-77-04
SOLN,TMB 1-C,MB,1000ML
1 L
3753
KPL
50-77-18
TMB MB SUBSTRATE 1-C,100ML
100 mL
638
KPL
54-11-50
KIT,PROT DETEC,WB,HRP,MS+RB,TMB
2500 cm2
4072
KPL
55-11-50
KIT,PROT DETEC,WB,AP,MS+RB,BCIP/NBT
2500 cm2
4072
 
Western Blot其他相关产品
蛋白酶抑制剂:抑制标本制备过程中蛋白酶的活性,大程度保证待测蛋白的完整性
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
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Biovision
K271-500
Protease Inhibitor Cocktail
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广谱蛋白酶抑制剂
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539131-1VL
Protease Inhibitor Cocktail Set I
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616370-10MG
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产品编号
产品名称
规格
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71-83-00
KIT,DETECTOR BLOCK,2X120ML&2X10GM
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50-61-00
KIT,BSA DILUENT BLOCK,2X100ML
200 mL
1535
KPL
50-61-10
SOLN,BSA DILUENT BLOCK,1000ML
1 L
6602
KPL
50-82-01
KIT,MILK DILUENT BLOCK,2X100ML
200 mL
1317
 
洗涤溶液:去除多余的未结合物质,进一步保证结果的特异性和灵敏度
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
KPL
50-63-00
KIT,WASH SOLUTION CONC.,4X200ML
800 mL
966
 
其他产品
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
KPL
60-00-51
HYBRIDIZATION BAGS,(8INX10IN),50/PK
50 bags
809
KPL
55-15-00
SOLN,AP STABILIZER,200ML
200 mL
1386
KPL
54-15-01
SOLN,HRP STABILIZER,200ML
200 mL
1199
 
洗脱和再杂交试剂:拥有ReBlot系统,同一张膜上反复多次检测不再是难题!
供货商
产品编号
产品名称
规格
报价
Millipore
2060
ReBlot Western Blot Recycling Kit
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2890
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2500
ReBlot Plus Kit
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1950
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ReBlot Plus Mild Antibody Stripping Solution, 10x
50ml
1150
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2504
ReBlot Plus Strong Antibody Stripping Solution, 10x
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1150
Millipore
2520
Blot Restore Membrane Rejuvination Kit, 10x
1 Kit
1950

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