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RNAlater液的组成成分及能够抑制RNA酶的原理

发表时间:2013-03-01  |  点击率:17275

     RNAlater是特殊的样品储存液,用于稳定新鲜样品里的RNA免受降解。刚采下的样品只要立即浸入这种无毒的液体中,就可以在不超过37度的高温天气下保存一天,或者在25度室温下保存一周;或者4度冰箱存放一个月;或者负20度长期保存而使RNA保持完整免受降解。方法很简单:样品必须裁成每边不超过0.5cm的小块,在室温下浸没于5倍体积的RNAlater中即可。RNAlater还可以直接加入到离心收集的细胞团甚至加入正在培养的细胞中。待要抽提RNA时只要将组织块取出直接加裂解Buffer、或者研磨、或者匀浆化,或者冻融处理就行,就像新鲜组织一样,而不用担心RNase,因为它们已经失活了。即使是脾脏这样RNase含量极为丰富、通常很难提到完整RNA的组织也能得到很好的结果。

很重要的一点是,RNAlater可以配合各种常见的RNA抽提试剂盒使用,例如QIAGEN的RNeasy系列、LTI/GIBCO的TRIzol、Ambion的RNAwiz、RNAzol、TRI、RNA STAT-60以及利用Oligo(dT)原理的mRNA抽提试剂盒,还有酚抽法。有些用户说RNAlater甚至可以加入裂解液中而不影响结果。
RNAlater适用于各种哺乳动物组织、植物、爪蟾、鱼类、果蝇、大肠杆菌和培养细胞。特别适合用于保存RNase含量特别丰富的组织、需要在不同时间段分别采样、在不同地点采样、没有液氮或低温冰箱而需要保存样品、没有干冰的条件下运送样品(比如可以在海南采样、只加冰袋快递到上海),甚至在室温下运送样品(比如上海采样连夜送北京)。当解剖需要很长时间时还可以将较大的组织浸入RNAlater后继续解剖。真是非常方便。

Extraction of high quality RNA from cells and tissue for gene expression analyses using real-time PCR or microarray methodologies is often problematic due to RNase contamination of samples and reagents. RNAlater from Ambion, Inc. offers a simple and convenient means to avoid frustrating RNA degradation within precious irreplaceable experimental samples. RNAlater is an aqueous, non-toxic tissue and cell storage reagent that permeates cells and stabilizes intracellular RNA in unfrozen samples. RNAlater preserves the quantity and quality of RNA in cells and tissues for up to 24 hr. at 37C, 1 week at 25C, and over 30 days at 4C. RNAlater treated samples can also be transferred to -20C or -80C for long-term storage. 
We have been using RNAlater routinely over the last two years in our microarray studies of gene expression in PBMC’s and intestinal lymphoid tissue. We have found that cryopreservation of cells and tissue from blood samples and biopsies invariably results in degradation and reduction in the quality of RNA present in the sample, and that use of RNAlater has virtually eliminated these problems. PBMC’s are immersed in RNAlater immediay following isolation and tissue samples are placed directly into RNAlater containing microfuge tubes before flash freezing and storage at -80C. Although our comparisons have shown that the total amount of RNA isolated is reduced slightly (by ~10%) from the total obtained in samples without RNAlater, the improvement in RNA quality and downstream data more than compensates for the loss. 
In summary, we have found RNAlater to be an extremely valuable asset in our ongoing microarray and Real-time PCR studies, and now require all other labs that send us material for microarray processing and analysis to use RNAlater during sample acquisition. Thus, we highly recommend the use of RNAlater for anyone working with RNA, especially those who require short or long-term archival storage of samples before they are processed for analyses.

RNAlater(以下内容源于Qiagen公司的产品说明书,仅供参考) 
1.简介 
RNAlater 是一种液态的,无毒的组织保存试剂。它能迅速稳定组织,保护非冷冻细胞RNA 于原位。获得组织块后,迅速浸泡在RNAlater 中保存,而不会引起RNA 的降解,这样可以不必马上处理样品或将样品冷冻在液氮之中以备以后处理。RNAlater 应保存在室温下,保质期6 个月。如放置在4℃条件下则会引起沉淀,此时需加热到37℃才可澄清。RNAlater 可广泛应用于多种脊椎动物样品。包括脑、心、肾、脾、肝、睾丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺。RNAlater 对大肠杆菌、果蝇、组织培养细胞、全血细胞和一些植物也有效。RNAlater 能否与RNA 提取试剂盒兼容?RNAlater 可与大多数RNA 提取方法相协调。特别是TRI Reagent., RNAwiz, TōTALLY RNA,RNAqueous, and Poly(A)Pure。 
2. 如何使用RNAlater 
RNAlater 只能用于新鲜组织,在浸入RNAlater 之前不能冷冻组织。简单切碎组织样品,任何一边的大厚度不能大于0.5cm, 然后将组织碎块放入到5 倍体积的RNAlater 中保存。
动物组织 
RNAlater 不会溶解或破坏组织样品的结构。如果需要的话,仍可将已经平衡在RNAlater 溶液中的组织取出并分割成更小的块再重新放入到RNAlater 中。小器官如鼠肝、肾和脾可以完整地保存在RNAlater 中。 
植物组织 
许多植物组织可以简单浸泡在5 倍体积的RNAlater 中保存。具有自然屏障防止扩散的植物如蜡表皮的叶组织可能需要先破坏其屏障,以允许RNAlater 进入组织。 
组织培养细胞 
沉淀细胞,用PBS 洗一次,再用少量的PBS 悬浮细胞,然后加5~10 倍体积的RNAlater 保存。 
白细胞 
如果将白细胞从红细胞和血清中分离出来,并按组织培养细胞一样处理后,白细胞便能有效地保存在RNAlater 中。不要将全血、血浆或血清中的RNA 保存在RNAlater 中,因为它们蛋白含量过高,与RNAlater 混合后易形成不溶的沉淀。 
细菌 
RNAlater 是抑菌的,虽然细菌在RNAlater 中不能生长,但细胞仍保持其完整性。大肠杆菌保存在RNAlater 中4℃条件下1 个月仍很完整,产生不降解的RNA。 
3. RNAlater 中样品的保存 
保存于-80℃ 
建议用于批量保存。将样品在4℃条件下孵育过夜,然后从RNAlater 溶液中取出样品保存于-80℃。对于组织培养细胞,不必移去RNAlater,只需简单冻存整个溶液。实验证明,细胞在-80℃条件下冻存于RNAlater 溶液中并未出现溶解。样品可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA的质和量都不会受到影响。 
保存于-20℃ 
建议用于批量保存。将样品在4℃条件下孵育过夜,然后转移到-20℃。样品在-20℃条件下不会冻结,但在存贮缓冲液中会有结晶形成,这并不影响随后的RNA 提取。样品可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA 的质和量都不会受到影响。 
保存于4℃ 
厂家认为,目前尚无证据证明样品存于4℃ 1 个月内会出现RNA 降解。 
如果没有冰箱: 
将样品放在尽可能冷的环境中。如果周围温度超过25℃,应尽可能使RNAlater 中的样品冰浴数小时。 
4. RNAlater 中样品的RNA 提取 
组织 
用消毒镊子将组织从存贮溶液RNAlater 中取出,浸泡在RNA 提取溶液中。一旦将组织放入RNA提取溶液中,匀浆一定要迅速进行。
细胞 
从存贮在RNAlater 中的细胞中提取RNA 有两种操作方法可供选择:去除RNAlater 或者从细胞与RNAlater 的混合物中直接提取RNA。 
5. 从RNAlater 中取出样品 
去除RNAlater 
因为RNAlater 的浓度比典型的细胞培养介质的浓度高,因此用通常沉淀活细胞的离心力无法沉淀RNAlater 中的细胞。离心沉淀细胞,去除RNAlater。(HeLa 细胞大约需要3000×g,但其他细胞可能不能容忍这个速度,或者他们需要更大的离心力。) 
从RNAlater 中的细胞直接提取RNA 
作为选择,我们可以用一步法破碎/提取溶液(如TRI Reagent 和RNAwiz )从没有去除 
RNAlater 的细胞中纯化RNA。这可通过向细胞混合物中加入10 倍体积的一步提取溶液完成, 
其他照常。 

RNAsecure:(以下内容源于Ambion 公司的产品说明书,仅供参考) 
1.简介 
在分子生物学试剂中用的RNAsecure 代替DEPC,有很多优点: 
1) 可以加入到不能用DEPC 处理的溶液中(如:Tris 或MOPS 缓冲液); 
2) 可以加入到不能被高压灭菌的溶液中; 
3) 可以加入到加酶之前的酶促反应中。Ambion 已经测试了有RNAsecure 试剂存在的如下酶促反应(先于酶加入):RNA 多聚酶T7,T3 和SP6 的体外转录(37℃),MMLV 和AMV逆转录(42℃),以及SuperTaq PCR(94℃),均没有出现酶抑制现象。 
2. 使用方法 
1) 用缓冲液或经过处理的溶液稀释RNAsecure 试剂到1×,充分混匀。 
2) 将混合物在60℃水浴温浴20 min,冷却至室温。这样的溶液可备用于接下来的RNA 提取和分析,或者保存于室温、4℃或-20℃以备将来使用。 
3) 为了消除任何可能发生在经过初处理之后的RNA 酶的污染,在使用前可以将RNAsecure 溶液在60℃水浴中重新温浴10~20 分钟。 
3. 注意事项 
RNAsecure 试剂只在高于45℃的条件下才有活性,但当反应体系孵育温度超过该温度时可能会使一些酶失活。因此,用RNAsecure 处理反应缓冲液时要以加入酶之前做为临界点,然后进行酶促反应时孵育温度低于45℃。注意:这不适用于Taq 多聚酶。

   
Ambion RNAlater
组织收集:RNA稳定溶液
RNAlater® Tissue Collection: RNA Stabilization Solution


 
使样品收集简便化—单一试剂即能立即使RNA酶失活,从而稳定组织或细胞内的RNA
• 能在任何时间、任何地点收集组织样品,并且在需要时可延后处理
• 灵活性更强—不需要在液氮中冷冻样品或者立即将样品送回实验室冰箱
• 消除了冷冻和/或碾磨的需求
• 该领域内的组织收集方法
• RNA 37oC稳定存放1天,25oC稳定存放一周,4oC 1个月或–20oC长期存放
 
RNAlater溶液的使用方法:


将切割后的组织(尺寸<0.5cm)没入5–10倍体积的室温RNAlater溶液中(如0.5g的样品需要2.0-5.0mL的RNAlater溶液)。溶液能渗入细胞,稳定RNA。随后样品能置于室温(25℃)保存1周,4oC一个月,或者在–20oC长期保存。进行RNA分离时,将组织从RNAlater溶液中取出,就如刚采集后一样操作。虽然某些例如骨头之类坚硬的组织可能需要更剧烈的破碎方法,但大多数组织能直接置于裂解缓冲液中,或者被匀浆化。经过RNAlater溶液处理并且冰冻的样品能用研钵和研杵碾磨,或者使其解冻后像处理新鲜组织一样操作,而不影响RNA的质量。RNAlater溶液能够成功地维持RNA的完整性,甚是在那些已知RNA酶含量较高的组织,从这些组织中通常难以提取完整RNA(例如脾脏)。
 
与多种RNA分离程序相容:


RNAlater溶液适用于不同的RNA分离程序,包括RNA分离一步法,玻璃结合法,酸性苯酚提取法以及使用oligo(dT)选择性分离mRNA的方法。组织样品易于从RNAlater溶液中取出,并且像新鲜组织一样在RNA分离裂解液中处理。另外,RNAlater处理的组织也可被冰冻碾磨,然后加入裂解液中。悬浮细胞中的RNAlater溶液能被离心后除去,然后加入裂解缓冲液,或者某些情况下,RNAlater溶液能和细胞一起直接加入到裂解缓冲液中。
 
RNAlater 溶液的多种用途:


RNAlater溶液已被测试用于各种哺乳动物组织、血液、植物、细菌、非洲蟾蜍、鱼类和果蝇。RNAlater溶液适用于:
• 在富含RNA酶的组织中保护RNA的完整性,例如脾脏或者胰脏在不同时间点收集样品,而不用马上处理来自每个时间点的样本
• 处理后的样品可用于将来的显微分离
• 填充动物腔,或者将器官浸没在RNAlater 溶液中,在长时间,冗长的解剖中稳定RNA
• 在不能立即进行RNA分离的地点收集样品
• 如果需要过夜运输,可以用冰浴甚至在室温条件下运输样品
 

订购信息:

 

 

 

 

 

 

 


 订购:

名称 产地 货号 规格  特价批发  
RNAlater® Ambion AM7020 100ml  1250.00  
RNAlater® Ambion AM7021 500ml  3650.00  

 

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