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考马斯亮蓝法测蛋白含量试剂盒说明书

发表时间:2013-04-12  |  点击率:9811

       

考马斯亮蓝法测蛋白含量试剂盒说明书

                                                

一、测定原理

考马斯亮蓝 G-250 染料,在酸性溶液中与蛋白质结合形成蓝色复合物,该复合物在

595nm 处有大吸收峰, 蛋白质-考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正

比,灵敏度高,适合微量蛋白质分析。

二、吸光值测定

按下表操作:

试剂 空白管 测定管

双蒸水 0.2ml /

待测液 / 0.2ml

考马斯亮蓝试剂 0.8ml 0.8ml

混匀,室温静止 10min,于 595nm 比色,空白管调零

三、标准曲线绘制

1mg/ml BSA 分别配制浓度为 020406080100µg/ml 的标准 BSA 溶液,

按下表操作:

试管号 1 2 3 4 5 6

 标准BSA浓度(µg/ml 0 20 40 60 80 100

标准BSA溶液

考马斯亮蓝试剂

0.2ml

0.8ml

混匀,室温静止 10min,于 595nm 比色,以 1 号试管调零

计算得标准曲线公式为:y=0.008x+0.06x 为蛋白浓度,y 为吸光值)

四、结果计算

将所测得的吸光值 A595代入标准曲线公式即可计算出蛋白浓度,单位为 µg/ml苏州科铭生物技术有限公司    www.cominbio.com

        comin@cominbio.com

注意事项:

1 试剂混匀后在 10~20min 完成比色

2 不可用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,测完成后立即用 95%乙醇冲洗

3 测定前用 1~2 个样做预实验,确保蛋白浓度在 0~100µg/ml 范围内,否则需要做相应需要稀释

                                     

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