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双缩脲法测蛋白含量试剂盒说明书

发表时间:2013-04-12  |  点击率:2031

 双缩脲法测蛋白含量试剂盒说明书

一、测定原理

强碱性溶液中,双缩脲与 CuSO4 形成紫色络合物,紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓

度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量,测定范围为

1~10mg 蛋白质。

二、吸光值测定

按下表操作:

试剂 空白管 测定管

双蒸水 0.2ml /

待测液 / 0.2ml

双缩脲试剂 0.8ml 0.8ml

混匀,室温静止 15min,于 540nm 比色,空白管调零

三、标准曲线绘制

10mg/ml BSA 分别配制浓度为 0246810mg/ml 的标准 BSA 溶液,按下

表操作:

试管号 1 2 3 4 5 6

 标准BSA浓度(mg/ml 0 2 4 6 8 10

标准BSA溶液

双缩脲试剂

0.2ml

0.8ml

混匀,室温静止 15min,于 540nm 比色,以 1 号试管调零

计算得标准曲线公式为:y=0.0411xx 为蛋白浓度,y 为吸光值)

四、结果计算

将所测得的吸光值 A540代入标准曲线公式即可计算出蛋白浓度,单位为 mg/ml

注意事项:

1 样品蛋白浓度须在 1~10mg/ml 范围内,低于 1mg/ml 不能用此法,高于 10mg/ml 须做相应稀释

2 该法受硫酸铵、Tris 缓冲液干扰,待测样品中应不含这些物质                                                      

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