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γ -谷氨酰转肽酶试剂盒说明书

发表时间:2013-04-15  |  点击率:3185

 γ -谷氨酰转肽酶(γ -glutamyltranspeptidase, γ -GT

试剂盒说明书(50T

                                          

一、测定意义

γ-GT γ-谷氨酰循环中的关键酶,能够催化转移谷胱甘肽或者其他 γ-谷氨酰基化合物

上的 γ-谷氨酰基到受体,同时它还催化谷胱甘肽和其他 γ-谷氨酰基化合物的水解反应产生谷

氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

γ-GT 主要存在于肾、胰、肝、肠和脑组织中。在胆汁淤积、炎症等刺激下,肝脏合成

γ-GT 增加,其活性改变对于肝胆系统疾病的诊断具有一定的价值。进行尿、血 γ-GT 检测,

有利于肾病与尿路感染的鉴别,也有利于肾病与肝胆胰等其它疾病的鉴别。特定的条件下,

γ-GT 会大量释放到血液中,这一性质在临床可用来检测组织细胞是否发生了病变,同时还

可以作为细胞分化、细胞老化的有效检测指标。

二、测定原理

γ-GT 可催化谷氨酰对硝基苯胺的 γ-谷氨酰基转移给 N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,

通过检测对硝基苯胺量,即可计算 γ-GT 酶活性。

三、实验中所需仪器及设备

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml 比色皿、双蒸水

四、试剂组成和配制

粉剂一×1

粉剂二×1

粉剂三×1

粉剂四×1

液体一×1

五、样品前处理与试剂配制

    1、提取液:称 0.1g 组织,加生理盐水 1ml 充分研磨,于 4℃,10000rpm 离心 15min

取上清液。

    2、试剂一配制:粉剂一与粉剂二充分溶解于一定双蒸水后定溶于 50ml

3、基质液配制:粉剂三充分溶解于液体一后,加试剂一至 50ml

六、γ-GT 测定操作

1、将基质液置于 37℃预温

2、按下表操作

空白管 对照管

双蒸水 0.1ml /

提取液 / 0.1ml

37℃预温的基质液 0.9ml 0.9ml

加基质液后迅速混匀,于 405nm比色,记录 1min 吸光值变化

七、标准曲线

      分别配制浓度为 020406080100μmol/L 的对硝基苯胺溶液,于 405nm 比色,

记录其吸光值,绘制标准曲线,计算得标准曲线公式为:y=0.006x+0.0016x 为对硝基苯胺

浓度,y 为吸光值,R

2

=0.999.

八、γ-GT 活力计算

1、γ-GT 活力单位定义:37℃下,每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺的 γ-GT

酶活量为 1U

a) 2、γ-GT 酶活力计算:△OD 测定管-OD 空白管,代入标准曲线 y=0.006x+0.0016

x 为对硝基苯胺浓度,y 为吸光值),即可算得对硝基苯胺微摩尔记为 A

γ-GTU/mg=A×V /V 样÷Cpr

                        =A×10÷Cpr

V 总:反应总体积(ml

V 样:所用样品体积(ml

Cpr:蛋白浓度(mg/ml

注意事项:

1 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,以免影响其活力

2 基质液请置于 37℃预温,否则会出现絮状物

3 加入基质液后需迅速混匀于分光光度计比色

4 此试剂盒只适用于动植物组织中 γ-GT 活力测定

5 试剂配制过程中好配带手套和口罩,试剂中有易挥发性物质

                                                                                                 

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