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.Roche 原位杂交(In Situ Hybridization)产品简介

发表时间:2013-04-17  |  点击率:1537

 原位杂交(In Situ Hybridization)产品:

研究背景
定 义
原位杂交(in situ hybridization)属于分子杂交的一种,是一种将标记探针直接于组织或细胞中的待测核酸杂交,并结合免疫细胞化学的原理使用合适的检测系统,从而对目标核酸序列进行定量定位的方法。
发展进程
1969 年Pardue 和Gall 先研发了此项技术,当时可用的*标记物是放射性同位素,放射自显影技术显然成为探针序列检测的方法。但放射性标记探针由于安全要求措施严格、有效期短、显影时间长及放射衰变引发的低分辨率等因素,原位杂交技术的发展和应用大受限制。直至非放射性标记探针的出现,彻底排除原位杂交中遇到的种种阻碍,使得该技术得到广泛应用。
 方法
非放射性原位杂交技术根据标记探针的类型分为两种。直接检测法(以荧光素直接标记探针)和间接检测法(以地高辛或生物素标记的核苷酸作为底物,通过PCR 合成标记探针。)
产品分类
Roche 提供的原位杂交产品根据实验的大致流程主要集中在以下三个部分:
(1)标记探针的制备;
(2)标记探针的纯化与杂交;

(3)靶序列与标记探针复合物的检测;

DNA 探针的标记

DNA 探针的标记方法常用的有 PCR 法、随机引物法和缺口平移法,原位杂交实验主要用缺口平移法,此方法易得到高比活性、均
匀、特异性高的探针,且易控制探针长度(对原位杂交非常重要)。也可以用 PCR 扩增法,此方法大的特点在能对量少且纯度不高的模板进行标记。
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RNA 探针的标记  
RNA 探针标记方法——体外转录法, 在 T3/T7/SP6 RNA 聚合酶作用下体外完成标记探针的合成。  
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寡核苷酸探针的标记
 寡核苷酸探针标记方法常用的为尾部嵌入法(tailing),3'-末端标记法和 5'-末端标记法. 3'-末端标记法标记的探针适合用于原位寡核苷酸探针标记方法常用的杂交实验,因为探针小易扩散到固定好的组织或细胞内。
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标记探针的纯化
核酸探针的杂交 
杂交是整个实验中非常重要的一部分,杂交受很多因素的影响,如 pH、温度、一价阳离子、有机溶剂等。
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免疫细胞化学法检测系统
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 Roche — —非放射性原位杂交研究的佳品牌图片

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