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使用抗生素和抗真菌素进行去污培养

发表时间:2010-01-18  |  点击率:1528

使用抗生素和抗真菌素进行去污培养
当不可替代的培养细胞发生污染时,研究人员可以尝试消除或控
制污染。首先,确定污染类型是细菌、真菌、支原体还是酵母。
将污染的培养物与其他细胞系隔离。实验用消毒剂清洗培养箱和
层流通风橱,检查HEPA(粒子空气)过滤器。
高浓度的抗生素和抗真菌素可能对某些细胞系有毒害作用。因
此,应测定剂效关系以确定抗生素和抗真菌素的毒性剂量。这一
点在使用Amphotericin B solubilized等抗真菌素或泰乐菌素等抗生
素时至关重要。下面给出了确定毒性剂量和去污培养的推荐步骤。
1.解离细胞,计算细胞个数,然后在不含抗生素的培养基中稀释细
胞。将细胞稀释到常规细胞传代所需的浓度。                                                                                              2.将细胞悬浮液转入多孔培养板或几个小培养瓶中。按浓度梯度将
选用的抗生素加入到每孔中。
3.每天观察细胞的毒性迹象,如塌陷、液泡的出现、汇合度下降或
者变圆。
4.确定抗生素的毒性剂量后,使用比毒性剂量低1-2倍浓度的抗生
素培养细胞2-3代。
5.用无抗生素培养基培养一代细胞。
6.重复第4步。
7.在无抗生素培养基中培养4-6代细胞以确定污染是否已经消除。

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