在组织切片过程中, 一些组织内含有骨质或钙化灶时, 含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同, 较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后, 再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多, 脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂, 对组织结构影响最小, 可以较好的保存组织的某些酶类, 经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢, 一般需要数周至数月。 EDTA脱钙液(酶保护型)主要由EDTA、酶保护剂等组成,pH值约为7.2-7.4。其优点是:①经EDTA脱钙的组织染色结果好;②对组织的结构损害比常规EDTA脱钙液更小;③减少脱钙骨ALP酶活性丢失。 注:使用螯合型脱钙液(如EDTA脱钙液)脱钙的组织样本不宜用化学检测法检测脱钙终点,可以用针刺等物理方法对脱钙情况进行检测判断!
|