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看完本篇你就知道什么是OCT冰冻切片包埋剂了

更新时间:2021-08-23  |  点击率:4142
  冷室、组织块、包埋剂、切片刀之间的温度平衡于优化的切片温度(optimum cutting temperature, OCT)附近,是获得高质量冰冻切片的保证。
 
  不同的组织因构成和脂质各异而具有不同的OCT温度。冰冻组织在接触刀刃的瞬间,局部温度短暂升高发生局部融化;随后切开的组织薄片暴露于冷室被再次骤冷冰冻。
 
  这种融化-冰冻温度变化是切片皱褶或断裂的内在原因,在此基础上切片的软硬度和厚薄度进一步影响皱褶产生。在切片过程中,冰冻包埋剂也须历经与组织类似的温度变化,这就要求包埋剂必须具有与组织块相近的冰冻速度和软硬韧度。
 
  OCT冰冻切片包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物,目前已广泛用于免疫组化实验室中,其用途是在冰冻切片时支撑组织,以增加组织的连续性,减少皱折及碎裂。又因OCT混合物为水溶性,故在漂片时可溶于水,所以在以后的染色中不会增加背景染色。
 
  利用OCT混合物(opti-mum cutting temperature compound)预先浸润组织,然后再进行恒冷箱切片,使切片质量得到改善。
 
  OCT包埋剂(SAKURA产品,MADE IN USA)包埋流程:
 
  1. 将放在蔗糖溶液中的组织块取出,放入20g L-1 蔗糖与OCT包埋剂1:1体积比例混合液中,室温浸泡2h
 
  2. 移入OCT包埋剂中室温浸泡4h,更换新的OCT包埋剂,室温浸泡6h.
 
  3. 将标本置于托物台,用恒冷箱切片机切片(一般-22℃),片厚10μm,贴于预处理的载玻片上,-20℃冰箱保存。