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了解一下中性蛋白酶的一般性质有哪些吧

更新时间:2021-10-12  |  点击率:2032
  大多数中性蛋白酶是含锌离子的金属酶,相对分子质量为35000~40000,等电点为pH值8~9。是微生物蛋白酶中最不稳定的酶,很易自溶,即使在低温冰冻干燥,也会造成相对分子质量的明显减少。
 
  (一)一般性质
 
  大多数微生物中性蛋白酶是金属酶,一分子酶蛋白中含一原子锌,分子质量35 000-40 000,等电点pH8~9,是微生物蛋白酶中最不稳定的酶,很易自溶,即使在低温冰冻干燥,也会造成分子质量的明显减少。
 
  代表性的中性蛋白酶是耐热解蛋白芽孢杆菌所产生的热解素与枯草杆菌的中性蛋白酶,这些酶在pH6~7稳定,超出此范围迅速失活。以酪蛋白为底物时,枯草杆菌蛋白酶最适pH为7~8,热解素是7~9,曲霉菌的酶是pH 6.5~7.5。
 
  一般中性蛋白酶的热稳定性较差,枯草杆菌中性蛋白酶在pH7,60*(2处理15min,失活90%;栖土曲霉3.942中性蛋白酶55℃处理10min,失活80%以上;而放线菌166中性蛋白酶的热稳定性更差,只在35℃以下稳定,45。
 
  C迅速失活。只有少数例外,如热解素在80℃处理1h,尚存酶活50%;有的枯草杆菌中性蛋白酶,在pH7,65℃酶活几乎无损失。酶的最适温度,取决于反应时间,在反应时间lo~30rain内,最适温度是45~50℃。钙离子可以增加酶的稳定性,并减少自溶。
 
  (二)活性中心
 
  酶的活性中心的锌离子,起着酶同底物之间的桥梁作用。
 
  有些酶的分子中尚含若干原子钙(表5—16)。钙具有稳定构象的作用,还同酶的耐拭杜右擎若活性中心的锌用EDTA去除后,用其他金属置换,由不同金属可得到活性不同的酶。
 
  借助此法可改进蛋白酶的活性以制备高活性蛋白酶结晶,据认为高活性型的酶其活性中心含有钙、钴、铜、锰、镍和锌原子,如用钡、镉、铁、钠、铅置换,则得到的蛋白酶无活性,结晶的钙型酶,酶活性比普通的结晶高3倍以上。
 
  以锰代替多黏芽孢杆菌中性蛋白酶活性中心的锌,酶活提高56%,并提高了耐热性。不少中性蛋白酶的氨基酸组成已经测定。
 
  芽孢杆菌中性蛋白酶中,均不含半胱氨酸所构成的二硫键,有的还不含甲硫氨酸。对于氨基酸的顺序尚不清楚。枯草杆菌中性蛋白酶,酶分子中的2~3个酪氨酸和1个组氨酸残基同锌原子一起是表现酶的活性所不可少的,而一个色氨酸和几个钙原子在维持酶的构象上有重要作用。
 
  短小芽孢杆菌中性蛋白酶,酶活性的表现除需要锌外,尚需丝氨酸残基。耐热性的中性蛋白酶热解素与枯草杆菌中性蛋白酶A,其活性中心氨基酸是一致的。
 
  (三)专一性
 
  中性蛋白酶的最小合成底物是Z—Gty—X—NH:,其中的X须是疏水性大分子氨基酸,若切开点肽键的羧基是由丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸或组氨酸残基所提供,则水解力增强。中性蛋白酶对于碱性蛋白酶的合成底物几乎*没有作用。
 
  不少芽孢杆菌也生产碱性蛋白酶。可利用羟基磷灰石吸附中性蛋白酶,而同碱性蛋白酶分开。由于中性蛋白酶优先切开亮氨酸或苯丙氨酸构成的肽键,因此可以用呋喃基丙烯酰甘氨基乙酰亮氨酸酰胺(FAGLA,Furyl acryloyl glycyl leucine amide)为底物,用分光光度法作精确的测定。