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DNA电泳常见问题分析

发表时间:2012-08-29  |  点击率:3289

 DNA电泳常见问题分析

 

 

常见问题 可能原因 建议解决方案

DNA降解避免核酸酶污染

电泳缓冲液陈旧

电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值升高,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。

建议经常更换电泳缓冲液。

电泳条件不合适

电泳时电压一般不超过20V/cm,温度<30℃,大分子量DNA电泳时温度应<15℃,检查电泳

缓冲液是否有足够的缓冲能力。

DNA上样量过多减少凝胶中DNA的上样量

DNA含盐量过高电泳前通过乙醇沉淀除去过多的盐等杂质

DNA条带模糊

上海索莱宝生物技术有限公司          

DNA有蛋白污染电泳前用酚/氯仿抽提除去蛋白等杂质

DNA变性电泳前勿加热并用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

 

对于λ Hin dⅢ 片段

cos位点复性

电泳前于65℃加热DNA5分钟,然后在冰上冷却5分钟。

电泳条件不合适

电泳时电压一般不超过20V/cm,温度<30℃,大分子量DNA电泳时温度应<15℃,建议经常

更换电泳缓冲液。

DNA变性电泳前勿加热并用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

DNA上样量不够增加凝胶中DNA的上样量

DNA降解避免核酸酶污染

DNA电泳常见问题分析

DNA跑出凝胶缩短电泳时间、降低电压、提高凝胶浓度

对于EB染色的凝胶所

用光源不合适

应用短波长(254nm)的紫外光源

小分子DNA跑出凝胶缩短电泳时间、降低电压、提高凝胶浓度

分子大小相近的DNA

带不易分辨

延长电泳时间并核准正确的凝胶浓度

DNA变性电泳前勿加热并用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

条带很弱或

无DNA条带

DNA分子量太大常规

凝胶不合适

在脉冲凝胶电泳上分析

 

 

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