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一种可处理Z难转染细胞的通用型试剂

发表时间:2014-02-14  |  点击率:1580

现在向您隆重介绍一种可处理难转染细胞的通用型试剂。可凭借一种具有以下特性的试剂盒,解放那些您真正关心的生物相关细胞类型:

  • 的性能——高的效率,适用于各种难以转染的以及常见的细胞类型
  • 更高的细胞活性——对细胞作用温和,毒性低
  • 功能多样——适用于DNA、RNA和共转染
  •  

                         

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在难转染细胞类型中具有广泛的优良性能

Lipofectamine® 3000试剂充分利用了我们先进的脂质体纳米颗粒技术,实现了超高转染性能和可重复的试验结果。其可在广泛的难转染和通用细胞类型(图1)中获得非凡的转染效率,同时提升细胞存活率。



图1. Lipofectamine® 3000试剂胜过了Lipofectamine® 2000和FuGENE® HD试剂。每一种试剂均用于以96孔形式转染EK 293、HeLa、LNCaP、HepG2和A549细胞系,并在转染后48小时分析GFP表达情况。在所有五种细胞系中,Lipofectamine® 3000都表现出了高于Lipofectamine® 2000和FuGENE® HD的GFP转染效率。

 

 图2. 蛋白印迹分析显示了HepG2细胞系中GST-STAT蛋白的表达。使用Lipofectamine® 2000试剂、Lipofectamine® 3000试剂、FuGENE® HD试剂(竞争产品1)和X-tremeGENE® HP试剂(竞争产品2)将GST-STAT质粒,在24孔板内转染入细胞。在转染后48小时,收集细胞并进行蛋白印迹分析。β-肌动蛋白转膜图代表四种样品上样量相等。


更高细胞活性,更低细胞毒性

在开发Lipofectamine® 3000时,我们对转染过程的四个步骤进行了优化,同时结合了我们先进的脂质体纳米颗粒技术。其所具有的超高转染效率使得我们可以减少试剂剂量,降低处理细胞时的潜在毒性风险。

 图3. 采用剂量的每种试剂,通过绿色荧光蛋白(GFP)表达载体,以96孔形式转染HeLa细胞。在转染后48小时,采用流式细胞仪进行分析,以测定百分比形式的转染效率以及GFP表达强度。相对于Lipofectamine® 2000试剂和Lipofectamine® LTX试剂,Lipofectamine® 3000试剂表现出了更高的转染效率和蛋白表达水平。


表1. 在一系列细胞系的测试中,Lipofectamine® 3000试剂获得了超过Lipofectamine® 2000试剂的转染效率。

  • 细胞系 #-C
  • 细胞系 D-J
  • 细胞系 K-P
  • 细胞系 R-Z
细胞类型Lipofectamine® 3000试剂转染效率Lipofectamine® 3000相对于 Lipofectamine® 2000试剂蛋白表达水平提高倍数
3T34
4T12
A4312
A5493
ACHN2
bEnd.39
BJ3
BT-5494
C2C123
C65
Caco-22
Caki-14
CHO-K11
CHO-S1
COLO 2054
COS-74

转染效率 (%): <30%     30-50%    51-79%    >80% 


增强您的癌症研究工作

使用具生物相关性的细胞系,可为您的研究课题提供具相关性的答案。Lipofectamine® 3000试剂适用于广泛的细胞谱系且兼具较高的转染效率,使您可以非常灵活地在研究中应用自己选择的细胞。在一系列提取自不同组织的癌症细胞中,Lipofectamine® 3000表现出了明显高于Lipofectamine® 2000试剂等*转染试剂的转染性能。采用Lipofectamine® 2000试剂时,仅有25%的选定癌症细胞系属于易转染(转染效率超过50%)的细胞系,而采用Lipofectamine® 3000试剂时,则有60%的细胞系属于易转染细胞系。

表2. 在癌症细胞系中,Lipofectamine® 3000试剂获得了超过Lipofectamine® 2000试剂的转染效率。

癌症细胞系Lipofectamine® 3000试剂转染效率Lipofectamine® 3000相对于 Lipofectamine® 2000试剂蛋白表达水平提高倍数
Hs 578.T3
SW4802
SK-MEL-282
4T12
RD4
Saos-24
PANC-13
NCI-H232
BT-5494
L68
SK-OV-33
DU 1452
HCC19375
SW6205
MDA-MB-4689
NCI-H46017
Caki-14

转染效率 (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%

 

 图4. 用Lipofectamine® 2000试剂和Lipofectamine® 3000试剂将GFP表达质粒转染进17种细胞系中,采用24孔形式(以0.5 µg质粒/孔的规格)和各试剂推荐的试验方案。在转染后48小时,分析GFP表达。每种条件均进行三次重复测试,图中的数据点为平均转染效率 + 标准偏差。


改善基因组编辑结果

开发Lipofectamine® 3000试剂,旨在突破输送技术的界限,促进生物相关系统内的新技术发展,例如基因组编辑。通过这一新试剂,GeneArt® TAL和CRISPR可以靶向HepG2和U2OS细胞内的AAVS1位点,同时表现出更佳的转染效率、平均荧光强度和基因组切割效果。这些改进之处有助于大限度减少繁重的下游工作,更便于进行干细胞处理,增强转基因在细胞基因组中的位点特异性插入。

下载应用说明 >



图5. GeneArt® TAL和CRISPR的切割效率。TAL和CRISPR靶向(A) U2OS和(B) HepG2细胞系中的AAVS1位点。采用GeneArt®基因组切割检测试剂盒分析切割效率。



图6. 使用CRISPR载体时的转染效率和蛋白表达。该载体含有OFP报告基因,并采用Lipofectamine® 2000或Lipofectamine® 3000转染试剂转染到(A) U2OS和(B) HepG2细胞系中。柱状图所示为报告基因的表达。图片所示为相应细胞表达OFP的荧光图。


*不必购买。此次促销面向中国大陆境内年满21岁的生命科学专业人士。样品申请必须于2014年6月30日之前或者样品发放完毕之前提交给我们,以二者之中的较早者为准。样品规格为0.1 mL。每名顾客限领一份。医护专业人士不得参与此次促销活动。本次促销不享受其它折扣或促销。如遇法律或法规,或公司/机构政策禁止、许可或限制,本次活动作废。可能会适用其他未注明的限制条件。

 

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