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胰蛋白酶消化液配置及保存

发表时间:2016-01-29  |  点击率:985

胰蛋白酶消化液配置及保存

一、蛋白酶消化液配置步骤

1.D-Hanks液高压灭菌之后,晾至室温,4℃保存备用。

2.称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中),加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右,调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中,4℃下磁力搅拌使完全溶解。

3.用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的适pH值),并加入0.02%EDTA以协助消化作用。

4.滤过除菌,-20℃冻存。

 

二、蛋白酶消化液配置过程中的注意事项

1.BSS的pH值应确定为7.2左右。

2.如配制的Hanks液高压灭菌后液体变混,则可将100 mL的CaCl2与含有其他成分的液体分别装瓶高压灭菌之后,再在无菌条件下配制,定容。这样可以避免高压灭菌后液体变混。

3.胰酶受热易失活,所以尽量避免盛夏配制,并且在配制过程中温度应始终保持在4℃左右。

4.胰酶研磨要充分,否则在过滤时会将较大的颗粒过滤掉,不能达到真正的浓度。

5.胰酶分装时尽量分装成多瓶,并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时体积会膨胀,而多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。

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