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红细胞裂解液配方及红细胞裂解

发表时间:2016-01-29  |  点击率:753

红细胞裂解液配方及红细胞裂解 

    红细胞裂解液的原理是氨根离子不能透过细胞膜,而其他离子可以,这样会造成细胞内部的离子浓度高于外部溶液内的离子浓度。这样就造成了渗透压差,外部的水分会进入到细胞内,造成细胞膨胀。而红细胞由于细胞结构较为简单,仅有细胞膜结构,对于膨胀的耐受能力较差,因此绝大部分就会被涨破,受到破坏。

红细胞裂解液配方:
A. 甲酸:1.2ml/L,溶于水中;
B. 碳酸钠:6g/L
氯化钠:14.5g/L
硫酸钠:31.3g/L,溶于水中,
C:多聚甲醛:10g/L,溶于PBS中
使用方法:
A液600ul 振荡15s
B液265ul 振荡 15s
C液100ul 振荡15s

红细胞裂解方法 

 取100 μl抗凝全血,加2 ml应用液3#,混匀15~20 s;加2 ml应用液2#,混匀15~20 s;加4 ml应用液1#,混匀15~20 s;300×g离心2 min,弃上清;收集沉淀,加PBS缓冲液,制成白细胞悬液,备用。
(这种红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求,价格低廉,是一种简便快捷、经济实用的白细胞纯化分选方法。
(二)红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)
(三)红细胞裂解液(139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl调 pH至7.2)
(四)红细胞裂解液的制备:碳酸氢钾(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g,加双蒸水至1000ml,即工作液。(该配方出自《实用流式细胞术彩色图谱》)

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