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质粒dna的提取及碱裂解法提取质粒原理
点击次数:627 发布时间:2016-01-29
 

   质粒dna的提取及碱裂解法提取质粒原理 

    质粒dna的提取是DNA技术中的必备实验技能。而碱裂解法是较常用的提取的方法。本文着重介绍了质粒dna提取及碱裂解法提取质粒原理。

    质粒DNA上携带的基因信息可经过基因表达实验后表现出相应的性状。质粒DNA的分离提取包括了培养细胞——收集——分离纯化三大步骤。

    质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外,质粒dna上携带了部分的基因信息,经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中,质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。

    从宿主细胞中提取质粒DNA,是DNA重组技术中基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤:

1、培养细菌使质粒扩增

2、收集和裂解细菌

3、分离和纯化质粒DNA

    碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是得率高,适合于大多数的和菌株,所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。碱裂解法提取质粒原理是采取酸碱度高达Ph12.6的碱溶液使DNA发生变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同,变性时前者虽然两条链分离,但仍然缠绕在一起不分开;而后者完全变性分,甚至出现断裂。因此,当加入中和液时,溶液Ph值恢复较低的近中性水平,此时, 质粒的两条小分子单链可迅速复性,恢复双链结构,但是主染色体DNA则无法复性。在离心时,大部分主染色体与细胞碎片,杂质等缠绕一起被沉淀,而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。

 
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