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NADP-苹果酸脱氢酶测试盒 微量酶标仪法 说明 技术 文章

发表时间:2019-04-02  |  点击率:453

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NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒

商品货号:MS1003
英文名称:Micro NADP-Malate Dehydrogenase(NAD-MDH)Assay Kit
别名:NADP-苹果酸脱氢酶试剂盒 NADP-MDH Kit NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒 NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1003-100管/96样索桥生物100管/96样¥600.00元 

测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。

测定原理:

NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

 

货号:MS1003                                                     规格:100管/96样

NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。

测定原理:

NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:提取液100 mL×1瓶,在4℃保存;

试剂二:液体20 mL×1瓶,在4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;

样本测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制:用时在试剂三中加入19mL试剂二和0.5mL蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

3、测定前将检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL样本和195μL工作液,混匀后立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需将酶液用提取液稀释,使A1-A2小于0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

NADP-MDH活力单位的计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)NADP-MDH活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NADP-MDH活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=12.86×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.005 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)NADP-MDH活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=12860×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NADP-MDH活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T =12860×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=25.72×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.005 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。

 

QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
QS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法50管/24样170
MS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法100管/48样330
QS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   微量法100管/96样2500

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