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NADH氧化酶(NOX)测试盒 常量可见分光光度法 说明 技术 文章

发表时间:2019-04-02  |  点击率:723

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NADH氧化酶(NADH Oxidase,NOX)试剂盒

商品货号:QS1004
英文名称:NADH Oxidase(NOX) Assay Kit
别名:NADH氧化酶试剂盒 NOX Kit NADH氧化酶(NOX)试剂盒 NADH氧化酶(NOX)测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1004-50管/48样 50管/48样¥450.00元 

 

测定意义: 

NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。

测定原理:

NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

 

货号:QS1004                                                      规格:50管/48样

NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。

测定原理:

NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制:

试剂一:液体50mL×1瓶,-20℃保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,-20℃保存。

试剂三:液体1mL×1瓶,-20℃保存。

试剂四:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂五:液体6 mL×1瓶,4℃保存。

试剂六:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入5mL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃

        保存,禁止反复冻融。

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

  • 准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
  • 将匀浆600g,4℃离心5min。
  • 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
  • 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的NOX(此步可选做)。
  • 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于NOX活性测定。

血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

  1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定

(1)试剂四、试剂五和试剂六于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min。

(2)在1mL石英比色皿中加入40μL样本、700μL试剂四、100μL试剂五和160μL试剂六,混匀,记录600nm处20s时吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

NOX活力单位的计算:

1、血清(浆)NOX活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA

V反总:反应体系总体积,1mL; V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。

 

辅酶Ⅰ系列    
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MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
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