NADH氧化酶(NOX)测试盒 常量可见分光光度法 说明 技术 文章
NADH氧化酶(NADH Oxidase,NOX)试剂盒
商品货号:QS1004
英文名称:NADH Oxidase(NOX) Assay Kit
别名:NADH氧化酶试剂盒 NOX Kit NADH氧化酶(NOX)试剂盒 NADH氧化酶(NOX)测试盒
检测方法:常量法
商品货号: | 商品品牌: | 规格 | 基本售价 | 选择规格 |
---|---|---|---|---|
QS1004-50管/48样 | 50管/48样 | ¥450.00元 |
测定意义:
NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。
测定原理:
NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
货号:QS1004 规格:50管/48样
NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。
测定原理:
NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制:
试剂一:液体50mL×1瓶,-20℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,-20℃保存。
试剂三:液体1mL×1瓶,-20℃保存。
试剂四:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:液体6 mL×1瓶,4℃保存。
试剂六:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入5mL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃
保存,禁止反复冻融。
样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
- 准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
- 将匀浆600g,4℃离心5min。
- 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
- 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的NOX(此步可选做)。
- 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于NOX活性测定。
血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
- 分光光度计预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。
- 样本测定
(1)试剂四、试剂五和试剂六于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min。
(2)在1mL石英比色皿中加入40μL样本、700μL试剂四、100μL试剂五和160μL试剂六,混匀,记录600nm处20s时吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。
NOX活力单位的计算:
1、血清(浆)NOX活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V反总:反应体系总体积,1mL; V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。
辅酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 500 |
MS1000 | 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 920 |
QS1001 | 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | 170 |
MS1001 | 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 330 |
QS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
MS1002 | NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
QS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 320 |
MS1003 | NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 850 |
QS1005-50 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 3200 |
QS1005-25 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 可见分光光度法 | 25管/24样 | 2000 |
MS1005 | 柠檬酸合酶(CS)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1400 |
QS1007 | 醇脱氢酶(ADH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 280 |
MS1007 | 醇脱氢酶(ADH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 550 |
QS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 800 |
MS1008 | 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48样 | 420 |
MS1009 | 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)测试盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)测试盒 | 微量法 | 100管/48样 | 1100 |
QS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24样 | 1280 |
MS1011 | 线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒 | 微量法 | 100管/96样 | 2500 |