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柠檬酸合酶(CS)测试盒 常量可见分光光度法 说明 技术 文章

发表时间:2019-04-02  |  点击率:461

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柠檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)试剂盒

商品货号:QS1005
英文名称:Citrate Synthase(CS)Assay Kit
别名:柠檬酸合酶试剂盒 CS Kit 柠檬酸合酶(CS)试剂盒 柠檬酸合酶(CS)测试盒,生化法试剂盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1005-25管/24样 25管/24样¥2000.00元 
QS1005-50管/48样 50管/48样¥3200.00元 

测定意义:                           

CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

 

货号: QS1005-50                                          规格:50管/48样

柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)试剂盒说明书

分光光度法

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

测定意义:                          

CSEC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:

试剂一:液体50mL×1 瓶,-20保存;

试剂二:液体10mL×1 瓶,-20保存;

试剂三:液体1mL×1 支,-20保存;

试剂四:液体50mL×1 瓶,4保存;

试剂五:粉剂×2 支,4保存,临用前加入800μL 无水乙醇,用不完的试剂4保存一周;

试剂六:粉剂×4 支,-20保存,临用前加入400μL 蒸馏水,用不完的试剂仍-20保存;

试剂七:粉剂×2 支,-20保存,临用前加入800μL 蒸馏水,用不完的试剂仍-20保存;

  •  

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

  1. 称取约0.1g 组织或收集500万细胞,加入1mL 试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
  2. 将匀浆600g4离心5min
  3. 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g4离心10min
  4. 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。
  5. 在步骤(4)中的沉淀中加入200uL 试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3 秒,间隔10 秒,重复30 次),用于线粒体CS 测定。
  6.  
  1. 分光光度计预热30min 以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
  2. 将试剂四、五、六和七在37(哺乳动物)或25(其它物种)孵育5min
  3. 样本测定

试剂名称(μL

测定管

试剂四

780

试剂五

30

试剂六

30

样本

30

试剂七

30

将上述试剂按顺序加入1 mL 玻璃比色皿中,加试剂七的同时开始计时,在412nm 波长下记录20 秒时的初始吸光度A1 和反应2min 后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1

CS 活性计算:

  1. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

CSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

  1. 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每分钟催化产生1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

CSnmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷ε×d×109W× V ÷V 样总)÷T=222.2×ΔA÷W

  1. 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

CSnmol/min /104 cell=[ΔA×V 反总÷ε×d×109500×V ÷V 样总)÷T=0.4444×ΔA

V 反总:反应体系总体积,9×10-4 LεTNB 摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV 样:加入样本体积,0.03 mLV 样总:加入提取液体积,0.202 mLT:反应时间,2 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细胞或细菌总数,500 万。

 

辅酶Ⅰ系列    
QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
QS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法50管/24样170
MS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法100管/48样330
QS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
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