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谷氨酰胺合成酶（Glutamine Synthetase，GS）活性检测试剂盒

商品货号：MS1807
英文名称：Micro Glutamine Synthetase（GS）Assay Kit
别名：谷氨酰胺合成酶试剂盒 GS Kit 谷氨酰胺合成酶（GS)试剂盒 谷氨酰胺合成酶（GS)测试盒
检测方法：微量法

• 产品详细介绍

测定意义：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

测定原理：

GS在ATP和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成的络合物在540nm处有大吸收峰，可用分光光度计测定。

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• 产品说明书

货号: QS1807                                             规格：50管/24样

谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）试剂盒说明书 可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷 氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储 存和运输形式。

测定原理：

GS 在 ATP 和 Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为 γ ─ 谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在 540nm 处有大吸收峰， 可用分光光度计测定。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和 蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：10mL×1 瓶，-20℃保存。

试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存。

试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入 5mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试 剂仍-20℃保                                                   存。

试剂四：10mL×1 瓶，4℃避光保存。

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超 声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃ 离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、在 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称（μ L）   测定管         对照管

试剂一         320

试剂二                       320

试剂三         140            140

样本          140            140

       混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 30min

试剂四         200            200

混匀，静置 10min 后，5000g，25℃离心 10min，取上清液测定 540nm 处的吸光值 A。△A=A 测 定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 

GS 活力单位的计算：

1、血清（浆）GS 活性 单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每 min 使 540 下吸光值变化 0.01 定义为一个 酶活力单位。

计算公式：

GS（U/mL）=Δ A×V 反总÷V 样÷0.01÷T =19×Δ A

2、组织、细菌或细胞 GS 活性

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。

GS（U/mg prot）＝Δ A×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T =19×Δ A÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义为一个酶 活力单位。

GS（U/g 鲜重）＝Δ A×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =19×Δ A÷W

（3）按细菌或细胞密度计算 单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义 为一个酶活力单位。

GS（U/10^4 cell）＝Δ A×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.038×Δ A

V 反总：反应体系总体积，0.8mL； V 样：加入样本体积，0.14mL；V 样总：加入提取液体积， 1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或 细胞总数，500 万。

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