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一氧化氮(NO)含量测定试剂盒说明书 技术文章
点击次数:1099 发布时间:2019-06-05
  • 当前位置: 首页 > 生理生化试剂盒 > 微量酶标仪法 > 氮代谢系列 > 一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量检测试剂盒

product-view

一氧化氮(Nitric Oxide,NO)含量检测试剂盒

商品货号:MS1804
英文名称:Nitric oxide Assay Kit
别名:一氧化氮含量检测试剂盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1804-100管/96样索桥生物100管/96样¥390.00元 

 

  • 产品详细介绍

测定意义:

NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

测定原理:

NO在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2-,在酸性条件下,NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO含量。为了排除样品色素等的影响,每个样品需做对照管。

 

 

  •  
  • 产品说明书
  •  

 

货号:QS1804                        规格:50 管/24 样

一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量测定试剂盒说明书 可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统 中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是 一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

测定原理:

NO 在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2-,在酸性条件下,NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化 合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在 550nm 处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计 算 NO 含量。为了排除样品色素等的影响,每个样品需做对照管。

自备实验用品及仪器:

天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 12mL×1 瓶,4℃避光保存。

样品处理:

1. 组织:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:

按照细胞数量(10^4个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 10000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。

3. 体液和培养液等其它液态样品:直接测定。

测定步骤和操作表

           对照管        测定管

样品(μ L)     400         400

试剂一(μ L)              250

试剂二(μ L)   250

试剂三(μ L)   250         250

混匀,4℃静置 15min,以对照管调零,1mL 玻璃比色皿,测定 A550

NO 含量计算:

标准曲线回归方程为:y= 0.016x -0.0103,R2 = 0. 9986

1、组织样品:

NO 含量定义:25℃时,每克样品或每毫克蛋白 15min 生成 1μ moL NO2 -,相当于 1μ moL NO。 (1)按样本质量计算

NO 含量(μ moL/g)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 = 0.14×(A550 +0.0103)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

NO 含量(μ moL/mg prot)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3 = 0.14×(A550 +0.0103)÷Cpr

2、其他样品:

NO 含量定义:25℃时,每升样品 15min 生成 1μ moL NO2-,相当于 1μ moL NO。

NO 含量(μ moL/L)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反总÷V 样 = 140×(A550 +0.0103)

V 反总:反应总体积,0.9mL;V 样:反应中样品体积,0.4mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1. 试剂盒 2-8℃保存。

2. 尽量使用新鲜样品进行检测,试剂三有腐蚀性,操作时请做好防护措施。

3. 若检测出得 OD 值在标准曲线范围外,请将样品进行适当的浓缩或稀释,并在计算公式中除 以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。

4. 低检出限为 0.65μ moL/L。

 

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