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结合态淀粉合成酶 (GBSS)试剂盒 说明 技术文章

发表时间:2019-06-12  |  点击率:1230

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结合态淀粉合成酶 (Granule-Bound Starch Synthase,GBSS)试剂盒

商品货号:QS3405
英文名称:Granule-bound starch synthase Assay Kit
别名:结合态淀粉合成酶试剂盒 GBSS Kit 结合态淀粉合成酶(GBSS)试剂盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS3405-25管/24样索桥生物25管/24样¥2000.00元 
QS3405-50管/48样索桥生物50管/48样¥3200.00元 

 

产品详细介绍

测定意义:

GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

测定原理:

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。

 

产品说明书

货号:QS3405-50            规格:50 管/48 样

 

   结合态淀粉合成酶 (Granule-bound starch synthase,GBSS)试剂盒说明书 

            紫外分光光度法

 

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链 淀粉的合成。

测定原理:

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP; 进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还 原为 NADPH,其中 NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比,通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量,可以计算 GBSS 活性。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 60mL×2 瓶,4℃保存;

液体一:7mL×2 瓶,4℃保存;

液体二:4mL×2 瓶,4℃保存;

液体三:8mL×2 瓶,4℃保存;

粉剂一:2 支,4℃保存;

粉剂二:2 支,4℃保存;

粉剂三:2 支,-20℃保存;

粉剂四:2 支,4℃保存;

粉剂五:2 支,4℃保存;

粉剂六:2 支,-20℃保存;

粉剂七:2 支,-20℃保存;

粉剂八:2 支,4℃保存;

粉剂九:2 支,4℃保存;

粉剂十:2 支,-20℃保存;

试剂一:液体×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μ L 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μ L 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

反应液Ⅰ的配制:临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支,依次把粉剂一、粉 剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

反应液Ⅱ的配制:临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支,依次把粉 剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融。

反应液Ⅲ的配制:临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支,依次把粉剂八、粉 剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

粗酶液制备:

称取 0.1~0.2g 组织(建议称取约 0.1g 组织),加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g , 4℃离心 10min,弃上清,在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂 

试剂名称(μ L)测定管
样本150
反应液Ⅰ270
混匀,30℃保温 20 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却
反应液Ⅱ150
混匀,30℃保温 30 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失), 冰浴冷却,10000g 25℃离心 10min,取上清液
上清液450
反应液Ⅲ300
试剂一10
试剂二10

混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2,计算 Δ A=A2-A1。

注意:反应液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

GBSS 活性计算:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 GBSS(nmol/min/mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =522×Δ A÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

GBSS 活性(nmol/min/g 鲜重)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T× 稀释倍数=522×Δ A÷W

V 反总:反应体系总体积,5.7×10-4 L;ε :NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm; d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.15 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;稀释倍数:1.71;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。

 

淀粉系列   单价 
QS3400 淀粉含量测试盒可见分光光度法50管/48样260
MS3400 淀粉含量测试盒微量法100管/96样500
QS3401α-淀粉酶测试盒可见分光光度法50管/24样250
MS3401α-淀粉酶测试盒微量法100管/48样480
QS3402β-淀粉酶测试盒可见分光光度法50管/24样460
MS3402β-淀粉酶测试盒微量法100管/48样900
QS3403-50ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒紫外分光光度法50管/48样2300
QS3403-25ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒紫外分光光度法25管/24样1600
MS3403ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒微量法100管/96样4400
QS3404-50可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒紫外分光光度法50管/48样3200
QS3404-25可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒紫外分光光度法25管/24样2000
MS3404可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒微量法100管/96样6000
QS3405-50结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒紫外分光光度法50管/48样3200
QS3405-25结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒紫外分光光度法25管/24样2000
MS3405结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒微量法100管/96样6000
QS3406淀粉分支酶(SBE)测试盒可见分光光度法50管/24样850
MS3406淀粉分支酶(SBE)测试盒微量法100管/48样1600

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