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粒体柠檬酸( MCA)含量试剂盒 说明 技术文章
点击次数:725 发布时间:2019-06-13

当前位置: 首页 > 生理生化试剂盒 > 常量分光光度计法 > 三羧酸循环系列 > 线粒体柠檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量 试剂盒

product-view

线粒体柠檬酸(Mitochondrion Citric Acid, MCA)含量 试剂盒

商品货号:QS2107
英文名称:Mitochondrial citric acid(MCA) Content Assay Kit
别名:线粒体柠檬酸含量测定试剂盒 MCA Kit 线粒体柠檬酸(MCA)含量测定试剂盒 线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS2107-25管/24样 25管/24样¥2000.00元 
QS2107-50管/48样 50管/48样¥2500.00元 

 

产品详细介绍

 

测定意义:

CA是线粒体三羧酸循环的个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理:

CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

 

 

产品说明书

货号:QS2107-25                        规格:25 管/24 样

 

   线粒体柠檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量试剂盒说明书

                 分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CA 是线粒体三羧酸循环的个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成, 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量, 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮 酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β -氧化途径提供的乙酰 CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理:

CA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α -酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α -酮酸进一 步与苯肼反应,生成相应的α -酮酸苯腙;α -酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度 的变化程度可反映出 CA 的含量。

自备实验用品及仪器:

分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制:

酸性提取液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

碱性提取液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 7.5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存;

标准品:液体 1mL×1 支,10μ mol/mL 柠檬酸标准液,4℃保存。

线粒体中柠檬酸提取:

    称 0.05~0.1g 样品(建议称 0.1g 样本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃离心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min 4℃离心 10min,弃上清(取 300μ L 该上 清液和 300μ L 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),取此溶液 300μ L 和 300μ L 碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量 测定)。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 330nm,蒸馏水调零。

2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。

3、样本测定:

空白管和标准管通常只需要各做一个。

试剂名称(μ L)空白管标准管测定管
试剂一300300300
蒸馏水300  
标准液 300 
样本  300
试剂二100100100
试剂三300300300

充分混匀,330nm 立即测定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,Δ A=A2 –A1。

 

柠檬酸含量计算:

(1)按蛋白浓度计算

柠檬酸含量(μ mol/mg prot)=[C 标准管×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白 管) ×V 样]÷(V 样÷Cpr)=10×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白管)÷Cpr 蛋白质含量需要另外测定。

(2)按样本鲜重计算

柠檬酸含量(μ mol/g 鲜重)=[C 标准管×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白 管) ×V 样]÷(W×V 样÷V 样总)=10×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白 管)÷W

C 标准管:标准液浓度,10μ mol/mL; V 样:加入反应体系中样本体积:0.3mL;V 样总:加 入提取液体积:1mL;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

低检测限为10nmol/mg prot或1μ mol/g鲜重。

 

三羧酸循环系列   单价 
QS2100α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS2100α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测试盒微量法 100管/96样1400
QS2101柠檬酸(CA)含量测试盒可见分光光度法50管/48样350
MS2101柠檬酸(CA)含量测试盒微量法 100管/96样690
QS2102琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒可见分光光度法50管/48样260
MS2102琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒微量法 100管/96样500
QS2103丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒可见分光光度法50管/48样720
MS2103丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒微量法 100管/96样1400
QS2104线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测试盒 紫外分光光度法50管/48样530
MS2104线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测试盒 微量法 100管/96样1000
QS2106-50乙酰辅酶A测试盒紫外分光光度法50管/48样3200
QS2106-25乙酰辅酶A测试盒紫外分光光度法25管/24样2000
MS2106乙酰辅酶A测试盒微量法 100管/96样5800
QS2107-50线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒紫外分光光度法50管/48样2500
QS2107-25线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒紫外分光光度法25管/24样1500
MS2107线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒微量法 100管/96样4700
QS2206乳酸含量(LA)测试盒可见分光光度法50管/24样650
MS2206乳酸含量(LA)测试盒微量法 100管/48样1280
QS2204丙酮酸(PA)含量测试盒可见分光光度法50管/48样300
MS2204丙酮酸(PA)含量测试盒微量法 100管/96样580
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