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Western Blot杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别

发表时间:2012-02-01  |  点击率:7503
杂交膜转印膜*纤维素膜NC与PVDF膜的区别
      杂交膜转印膜*纤维素膜NC与PVDF膜的区别
1. *纤维素膜
*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色荧光显色;背景低,信噪比高。NC的使用也很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;比如NC很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途--因为经不起多次“折磨”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC--混有含醋酸纤维(CM)的NC结合力会有所降低。另外提醒一句:由于NC上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时好使用较温的Tween20,而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果好)。一般而言,NC越纯,其蛋白结合能力就越高,所以要增加WB的灵敏度分辨率,提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果NC搀杂一些醋化纤维素--这在前面已经提到,会影响蛋白质结合。Protran由于是纯NC,比较脆,机械耐受力欠佳,需要小心操作,如果担心自己“粗手粗脚”,那么就可以考虑一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著称的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是实惠的选择,只不过要自己动手裁剪--切记,必须带手套操作。
*纤维素膜生产商:
GE WHATMAN BA83 BA85  价格  1950.00/卷  有现货
WHATMAN转印迹膜转印膜10401396 10401196WHATMAN*纤维素膜(NC膜)转印迹膜转印膜10401396 10401196其它的*纤维素杂交膜可能含有大量的醋酸纤维素,这会降低蛋白的结合能力。Protran杂交膜采用纯*纤维素制成,具有好的操作强度,兼容多种检测方法,包括同位素法,化学发光法(以luminol为基础),比色法和荧光法等。

与PVDF膜相比,Protran*纤维素膜在使用中不需要甲醇预湿步骤,这使它可以用于那些需要亲水性环境的蛋白质的转移,在转移之前,膜仅需要在水中简单润湿,然后置于转移缓冲液中,而不再需要其它预湿步骤。
 

高结合力,低背景
除了具有高结合能力以外,Protran*纤维素膜本身产生的背景非常低,膜特有的表面性质保证了优异的信噪比,而同时却不需要严格的清洗条件。

小分子蛋白的高保留率
Protran*纤维素膜有多种孔径大小可供选择,使不同的应用都可以获得佳的效果。0.2μm孔径的Protran BA83*纤维素膜通过减少小分子“下漏”来保留分子量小于20KD的蛋白质分子。0.45μm孔径的Protran BA85*纤维素膜是较大分子量样品和常规核酸研究的理想选择。0.1μm孔径的Protran BA79则用于分子量低于7kD的小分子蛋白转移。
 

Protran*纤维素膜的一个主要优势在于,经实验证明,结合在Protran膜上的蛋白能够保持分子识别活性长达5年。
 

Protran杂交三明治组合
由1张预切的*纤维素膜和2张3MM层析杂交纸组成的三明治包装,帮您节省更多的时间。这些膜都是用于杂交的质量好的NC膜——Protran BA83或者BA85。

Protran *纤维素膜的结合能力为80~150µg/cm2,可高压灭菌(液体冷循环)

GE RPN303C
PALL 66485 常用的NC膜 30cm*3m/卷超低特价:1250.00/卷现货
 
2. PVDF
与*纤维素膜相比,PVDF膜在蛋白质截留能力,机械强度化学相容性上都更优越的性能。市售*纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍!)。但是PVDF膜大的优点不仅于此:更好的机械强度化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用多重免疫检测中成为理想选择;而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的,特别是需要做N端蛋白测序,在相当“严酷”的清洗条件下,当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色,笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的*选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡,才能用,而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理(不过要真出现这种问题也是自己欠扁,谁要你不小心呢,转膜前处理也就罢了,转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢)。PVDF膜同样分0.45um0.2um的,后者孔径小,对小分子蛋白有较好的拦截吸附,背景可能会比前者稍高。
pvdf膜生产商:
MILLIPORE 特价 常年 现货
IPVH00010  0.45um  1650.00/卷
ISEQ00010  0.22um   2050.00/卷
 
PALL 66543      2150.00/卷
 
卷膜经济实惠,裁剪剩下的边角料还可以用来做点杂交。再次强调的是,疏水PVDF膜在用前必须经过50%或以上体积比的甲醇或者乙醇溶液处理几分钟,待膜变成半透明后用纯水漂洗一下,转入电泳缓冲液平衡才能用

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