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用于检测未知抗原的双抗体夹心法

发表时间:2012-06-04  |  点击率:1081

 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

1. 包被:用0.05M pH9.5碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含
量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,
4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分
钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,
置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳
性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的
稀释度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液
0.1ml,37℃孵育10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜
色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色
的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测
仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调
零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为
阳性。

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