真菌基因组DNA提取的介绍
更新时间:2025-10-24 | 点击率:36
真菌基因组DNA提取是分子生物学研究中的基础实验技术,其质量直接影响后续实验(如PCR、测序等)的成功率。由于真菌细胞壁厚且结构复杂,提取过程需兼顾裂解效率与DNA纯度。其核心目标是从真菌的菌丝体、孢子或子实体中,分离获得高纯度、高完整性的基因组 DNA,用于后续 PCR 扩增、基因克隆、测序等实验。
真菌基因组DNA提取的核心逻辑的是:破碎细胞壁→释放核酸→去除蛋白质/ 多糖/色素等杂质→纯化 DNA→洗脱回收。
破壁:利用物理、化学或酶解方法破坏坚硬的细胞壁和细胞膜,使胞内 DNA 释放到缓冲液中;
去蛋白:通过蛋白酶K降解蛋白质,或用酚 / 氯仿抽提去除蛋白质杂质;
去多糖/色素:利用高盐溶液、吸附柱特异性结合等方式,分离 DNA 与真菌有的大量多糖(易与 DNA 共沉淀,影响后续实验);
纯化:通过乙醇 / 异丙醇沉淀或硅胶柱吸附,获得纯净的 DNA;
洗脱:用低盐缓冲液(如 TE 缓冲液)或超纯水溶解 DNA,便于保存和使用。
操作规范:
低温操作:离心和保存步骤需在4℃或冰上进行,防止DNA降解。
避免机械剪切:轻柔混匀,防止DNA断裂。
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