Product classification
糖原系列
糖异生系列
其他系列
信号系列
土壤系列
离子系列
淀粉系列
蛋白酶系列
蔗糖系列
线粒体呼吸链系列
抗逆系列
抗氧系列
氧化系列
P450系列
糖代谢系列
脂肪酸代谢系列
酯酶系列
TCA系列
三羧酸循环系列
氮代谢系列
辅酶II 系列
谷胱甘肽系列
蛋白含量测定系列
糖酵解系列
维生素c代谢系列
过氧化氢系列
氨基酸代谢系列
ATP系列
辅酶I系列
Relevant Articles
柱式法提取细胞 RNA 试剂盒
货号:R1250
规格:50T/100T
保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,有效期 1 年。2℃-8℃保存时间更长。
注意:使用前请先在结合液中加入异丙醇,漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。
产品简介:
该试剂盒对经典的异硫氰酸胍抽提 RNA 的方法进行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解细胞,释放出 RNA 的同时灭活 RNase。RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜上,再通过一系列漂洗和离心等步骤进一步将蛋白等杂质去除,最后用 RNase-Free ddH2O 将 RNA 从硅基质膜上洗脱。本试剂盒操作快速便捷,安全无需使用酚、氯仿等有毒试剂,操作安全。
操作步骤:
1、细胞裂解取 1*106~7 个细胞,每管加入 500ul 裂解液 A,加入 50ul 溶液 B 用移液枪吹打混匀,RT 放置 5min。
2、向离心管中加入 700μl 结合液 C(使用前请先检查是否已加入异丙醇),上下颠倒充分混匀。
3、向吸附柱中加入 600ul 混合液,静置 1min。4℃ 12000rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管(收集管留下,用于步骤 5 使用)中。
备注:由于体积过大,需二次上柱,再将剩余混合液重复步骤 3
4、将吸附柱放到新的干净的 2ml 收集管上,在吸附柱中加入 500μL RNA 洗脱液,4℃,12000rpm 离心 2min,收集滤液,扔掉吸附柱。
5、在滤液中加入 700μl 结合液,用移液枪吹打混匀后加入到新的吸附柱中,(使用步骤 3 的收集管),4℃,12000rpm 离心 2min,弃滤液。
备注:由于体积过大,需二次上柱,再将剩余混合液重复步骤 5
6、向离心管中加入 600μL 漂洗液 1(使用前请确认是否已加入无水乙醇),静置1min,4℃,12000rpm 离心 1min,弃滤液。
7、向离心管中加入 600μL 漂洗液 2(使用前请确认是否已加入无水乙醇),4℃,12000rpm 离心 1min,弃滤液。
8、4℃,12000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口室温放置 3min,以除去多余的乙醇。
9、将吸附柱放到一个干净的离心管上,向吸附柱中加入 30-100μL 洗脱液,室温放置 2min,4℃,12000rpm 离心 2min,得到 RNA 溶液,RNA 保存于-80℃。
注意事项:
1、所有相关器皿耗材都应为 RNase-free 产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中 RNA 酶污染样品。
2、洗脱液的体积不应少于 30μL,体积过少会影响提取效率,RNA 产物应保存在-80℃,以防 RNA 降解。
3、RNA 浓度及纯度检测:提取的 RNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260/OD280 比值应为 2.0-2.2。
备注:106 细胞样品,用 50μL RNase-free ddH2O 洗脱。