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柱式法提取组织 RNA 试剂盒
货号:R1240
规格:50T/100T
保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,有效期 1 年。
注意:使用前请先在洗涤液和漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。
产品简介:该试剂盒对经典的异硫氰酸胍抽提 RNA 的方法进行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解细胞,释放出 RNA 的同时灭活 RNase。RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜上,再通过一系列漂洗和离心等步骤进一步将蛋白等杂质去除,最后用 RNase-Free ddH2O 将 RNA 从硅基质膜上洗脱。本试剂盒操作快速便捷,安全无需使用酚、氯仿等有毒试剂,操作安全。
操作步骤:
1、细胞裂解取 25mg 左右组织,每管加入 600ul 裂解液,小钢珠破碎,冰浴放置 5min。
2、向吸附柱中加入混合液。4℃ 13000rpm 离心 3min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
3、向吸附柱中加入 600ul 洗涤液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),4℃13000rpm 离心 2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
4、向吸附柱中加入 50ul Dnase 酶,静置 10~15min。
5、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)。4℃13000rpm 离心 2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、重复操作步骤 5。
7、4℃ 13000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口室温放置 3min,以除去多余的乙醇。
8、将吸附柱放到一个干净的离心管上,向吸附柱中加入 30-100μL 洗脱液,室温放置 2min,4℃,13000rpm 离心 1min,得到 RNA 溶液,RNA 保存于-80℃。
注意事项:
1、所有相关器皿耗材都应为 RNase-free 产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中 RNA 酶污染样品。
2、洗脱液的体积不应少于 30μL,体积过少会影响提取效率,RNA 产物应保存在-80℃,以防 RNA 降解。
3、RNA 浓度及纯度检测:提取的 RNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260/OD280 比值应为 2.0-2.2。
备注:25mg 小鼠肝组织样品,用 50μL RNase-free ddH2O 洗脱。
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