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CS测试盒 微量酶标仪法 说明 技术 文章
点击次数:321 发布时间:2019-04-03

product-view

柠檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)活性检测试剂盒

商品货号:MS1005
英文名称:Micro Citrate Synthase(CS)Assay Kit
别名:柠檬酸合酶试剂盒 CS Kit 柠檬酸合酶(CS)试剂盒 柠檬酸合酶(CS)测试盒,生化法试剂盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1005 -100管/48样索桥生物100管/48样¥3500.00元 

 

测定意义:

CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

 

 

货号:MS1005                                                     规格:100管/96样

柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                          

CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:液体20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:液体28mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入1.2mL蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

  • 称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
  • 将匀浆600g,4℃离心5min。
  • 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
  • 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。
  • 在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CS测定。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂五中加入0.6mL无水乙醇和13mL试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)测定管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、220μL试剂五和10μL试剂六,混匀,37℃反应15min后立即测定吸光值A1。

(3)对照管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、220μL试剂四和10μL试剂六,混匀,37℃反应15min后立即测定吸光值A2。

(4)计算ΔA=A1-A2,每个测定管设一个对照管。

CS活性计算:

  1. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=23.8×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0475×ΔA

V反总:反应体系总体积,2.4×10-4 L;ε:TNB摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

  1. 使用96孔板测定的计算公式如下:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=235.3×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=47.5×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.095×ΔA

V反总:反应体系总体积,2.4×10-4 L;ε:TNB摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,15 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

 

辅酶Ⅰ系列    
QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
QS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法50管/24样170
MS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法100管/48样330
QS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   微量法100管/96样2500

 

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