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丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒 微量酶标仪法 说明 技术 文章
点击次数:404 发布时间:2019-04-03

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丙酮酸脱羧酶(PDC)活性检测试剂盒

商品货号:MS1006
英文名称:Micro Pyruvate Decarboxylase (PDC) Assay Kit
别名:丙酮酸脱羧酶试剂盒 PDC Kit 丙酮酸脱羧酶(PDC)试剂盒 丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1006 -100管/96样索桥生物100管/96样¥1400.00元 

测定意义:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理:

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。

 

货号:MS1006                                                    规格:100管/96样

丙酮酸脱羧酶(PDC)活性测定试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理:

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。

自备实验用品及仪器:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体×1 瓶,﹣20℃保存。

混合试剂:临用前配制,小心把试剂四转移到试剂三中,充分溶解。

试剂六:液体×1 管,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200W,工作3s,间歇10s,工作35次),16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

2、组织处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

PDC 测定操作:

1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到340nm,蒸馏水调零。

2.试剂二置于25℃水浴中预热30min。

3.空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A1和A2。

4.测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A3和A4。

注意:空白管只需测定一次。

PDC 活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中,每毫克蛋白每分钟催化1μmolNADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(Cpr×V样)÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中,每克组织每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC(μmol/min/g) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(W×V样÷V样总) ÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中,每104个细胞每分钟催化1μmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量

(4)按血清(浆)体积计算

活性单位定义:25℃中,每毫升血清(浆)每分钟催化1μmol NADH氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/mL) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷V 样÷÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4 L,V 样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量试剂盒;W :样品质量; T:反应时间,1 min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中,每毫克蛋白每分钟催化1μmol NADH氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(Cpr×V 样) ÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中,每克组织每分钟催化 1μmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/g) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(W×V 样÷V 样总) ÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中,每104个细胞每分钟催化1μmol NADH氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量

(4)按血清(浆)体积计算

活性单位定义:25℃中,每毫升血清(浆)每分钟催化1μmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (μmol/min/mL) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷V 样÷÷T

=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V 总:反应体系总体积,0.2mL=2×10 -4 L,V 样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量试剂盒;W :样品质量; T:反应时间,1min。

注意事项:配制好的混合液3天内使用完。

 

辅酶Ⅰ系列    
QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
QS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法50管/24样170
MS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法100管/48样330
QS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   微量法100管/96样2500
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