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醇脱氢酶(ADH)测试盒 常量可见分光光度法 说明 技术 文章

发表时间:2019-04-10  |  点击率:640

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乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)活性测定试剂盒

商品货号:QS1007
英文名称:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
别名:乙醇脱氢酶试剂盒 ADH Kit 乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1007-50管/48样 50管/48样¥280.00元 

测定意义:

ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理:

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。

 

货号: QS1007                                             规格:50管/48样

乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性测定试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理:

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。

自备实验用品及仪器:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,室温保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。临用前把试剂三转移到试剂二中,4℃保存。                 

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存。

试剂四:液体×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。

ADH测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。

3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。

4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。

注意:空白管只需测定一次。

计算公式:

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(Cpr×V样)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/g鲜重) =[(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/104cell) = [(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/mL) = [(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷V样÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管)

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。

注意事项:

  1. 上清液蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
  2. 配制好的试剂二3天使用完。

 

辅酶Ⅰ系列    
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