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醇脱氢酶(ADH)测试盒 微量酶标仪法 说明 技术文章
点击次数:394 发布时间:2019-04-10

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乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒

商品货号:MS1007
英文名称:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
别名:乙醇脱氢酶试剂盒 ADH Kit 乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1007-100管/96样索桥生物100管/96样¥550.00元 

测定意义:

ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理:

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。

 

货号:MS1007                                                     规格:100管/96样

乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理:

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。

自备实验用品及仪器:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,室温保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。临用前把试剂三转移到试剂二中,4℃保存。                  

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存。

试剂四:液体×1支,4℃保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4离心20min,取上清置冰上待测。
  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。

ADH测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。

3. 空白管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸馏水、160μL试剂二和20μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。

4. 测定管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。

注意:空白管只需测定一次。

计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(Cpr×V样)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/g 鲜重) =[(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/104cell) = [(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/mL) = [(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷V样÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管)

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(Cpr×V样)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/g 鲜重) =[(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/104cell) = [(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管) ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。

ADH (μmol/min/mL) = [(△A测定管△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷V样÷T

=1.61×(△A测定管△A空白管)

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。

注意事项:

  1. 上清液蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
  2. 配制好的试剂二3天使用完。
辅酶Ⅰ系列    
QS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样500
MS1000辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法100管/48样920
QS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法50管/24样170
MS1001乳酸脱氢酶(LDH)测试盒微量法100管/48样330
QS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1002NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒微量法100管/96样550
QS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1003NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒微量法100管/96样600
QS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  可见分光光度法50管/48样450
MS1004NADH氧化酶(NOX)测试盒  微量法100管/96样850
QS1005-50柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法50管/48样3200
QS1005-25柠檬酸合酶(CS)测试盒可见分光光度法25管/24样2000
MS1005柠檬酸合酶(CS)测试盒微量法100管/48样3500
QS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法50管/48样720
MS1006丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法100管/96样1400
QS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒紫外分光光度法50管/48样280
MS1007醇脱氢酶(ADH)测试盒微量法100管/96样550
QS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒紫外分光光度法50管/48样800
MS1008单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒微量法100管/96样1550
QS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样420
MS1009乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法100管/96样800
QS1010NAD激酶(NADK)测试盒可见分光光度法50管/48样600
MS1010NAD激酶(NADK)测试盒微量法100管/48样1100
QS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   紫外分光光度法25管/24样1280
MS1011线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒   微量法100管/96样2500
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