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非蛋白巯基测定试剂盒说明书 微量法 技术文章

发表时间:2019-06-04  |  点击率:507
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非蛋白巯基检测试剂盒

商品货号:MS1520
英文名称:Non-protein sulfhydryl group Assay Kit
别名:非蛋白质巯基试剂盒 非蛋白质巯基测试盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1520-100管/48样索桥生物100管/48样¥200.00元 

 

  • 产品详细介绍
  •  

 

测定意义:

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理:

巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有大吸收峰。

 

 

  • 产品说明书

货号:MS1520                                    规格:100 管/48 样

非蛋白巯基测定试剂盒说明书 微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功 能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理:

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处 有大吸收峰。 自备实验用品及仪器: 天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 1 mL×1 管,4℃避光保存。

样品的制备:

1. 动物、植物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后加入 4mL 甲醇,室温震荡 10min,然后 10000g, 4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细 胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min) 然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

3. 血清、培养液:取 0.1mL,加 0.4mL 甲醇,室温震荡 10min,然后 10000g,4℃离心 10min, 取上清置冰上待测。

操作步骤:

1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

2、操作表

                     对照管              测定管

样品(μ L)              40                 40 

试剂一(μ L)            150                 150

试剂二(μ L)                               10

H2O(μ L)              10 

 

计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.7236 x,R 2 = 0.9994

1. 组织:

非蛋白质巯基含量(μ mol/g 鲜重)= 1.7236 /A ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×W) ×5=14.5×Δ A÷ W

2. 血清、培养液:

非蛋白质巯基巯基含量(μ mol/mL)= 1.7236 /A ×V 反总÷V 样×5=14.5×Δ A

3. 细胞:

非蛋白质巯基含量(μ mol/10^4)= 1.7236 /A ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5 =14.5×Δ A÷细胞数量

V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;

注意事项: 低检出限为 10μ mol/L。

 

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.8618x,R 2 = 0.9994

1. 组织:

非蛋白质巯基含量(μ mol/g 鲜重)= 0.8618 /A ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×5= 29×Δ A÷W

2. 血清、培养液:

非蛋白质基含量(μ mol/L)= 0.8618/A ×V 反总÷V 样×5=29×Δ A

3. 细胞:

非蛋白质巯基含量(μ mol/10^4)= 0.8618 /A ×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5 =29×Δ A÷细胞数量

V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;

 

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