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苯丙氨酸解氨酶试剂盒说明书 技术文章
点击次数:429 发布时间:2019-06-04
  • 当前位置: 首页 > 生理生化试剂盒 > 微量酶标仪法 > 氧化与抗氧系列 > 苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)活性检测试剂盒

product-view

苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine Ammonialyase,PAL)活性检测试剂盒

商品货号:MS1604
英文名称:Micro Phenylalanine Ammonia-lyase (PAL) Assay Kit
别名:苯丙氨酸解氨酶试剂盒 PAL Kit 苯丙氨酸解氨酶(PAL)试剂盒 苯丙氨酸解氨酶(PAL)测试盒
检测方法:微量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
MS1604 -100管/96样索桥生物100管/96样¥1000.00元 

 

  • 产品详细介绍
  •  
  •  

 

测定意义:

PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

测定原理:

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm处有大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

 

  • 产品说明书

货号:MS1604                   规格:100 管/96 样

 

   苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)试剂盒说明书

                微量法 

 

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

 

测定意义:

PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关 键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植 物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

 测定原理:

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm 处有大吸收值,通过 测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 板(UV 板)、研钵、冰和蒸馏水。

 试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。 

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存; 

试剂三:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。 

 

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。 

2、准备 96 孔 UV 板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检 测波长小于 340nm 务必使用 UV 板)。

3、在 EP 管或 96 孔 UV 板中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μ L)           测定管               对照管

样本                      5

试剂一                  145                   150

试剂二                  40                    40

                混匀,30℃ 准确反应 30min 

试剂三                 10                     10

混匀,静置 10min 后, 290nm 处记录测定管吸光值 A1 和对照管吸光值 A2,△A=A1-A2。 注意:对照管只要做一管

PAL 活性计算:

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1) 按蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.1 为一个酶活性 单位。

 PAL(U/mg prot)=Δ A×V 反总÷(Cpr× V 样)÷0.1÷T =13.3×Δ A÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.1 为一个酶活性单位。 

PAL(U/g 鲜重)=Δ A×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.1÷T =13.3×Δ A÷W

V 反总:反应体系总体积,0.2mL; V 样:加入样本体积,0.005mL;V 样总:加入提取液体积, 1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。 

用 96 孔板测定的计算公式如下

(1) 按蛋白浓度计算 单位定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.05 为一个酶活 性单位。

PAL(U/mg prot)=Δ A×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.05÷T =26.6×Δ A÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.05 为一个酶活性单位。

PAL(U/g 鲜重)=Δ A×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.05÷T =26.6×Δ A÷W

V 反总:反应体系总体积,0.2mL; V 样:加入样本体积,0.005mL;V 样总:加入提取液体积, 1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

 

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