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谷胱甘肽还原酶(GR)活性测定试剂盒说明书 技术文章
点击次数:775 发布时间:2019-06-06
  • 当前位置: 首页 > 生理生化试剂盒 > 常量分光光度计法 > 辅酶II系列 > 谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)活性测定试剂盒

product-view

谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase, GR)活性测定试剂盒

商品货号:QS1111
英文名称:Glutathion Reductases(GR) Assay Kit
别名:谷胱甘肽还原酶试剂盒 GR Kit 谷胱甘肽还原酶(GR)试剂盒 谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1111-50管/48样索桥生物50管/48样¥260.00元 

 

  • 产品详细介绍

 

测定意义:

GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GR被TrxR取代)。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。

测定原理:

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。

 

  •  
  • 产品说明书
  •  

货号:QS1111                           规格:50 管/48 样

 

谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)活性测定试剂盒说明书

                               紫外分光光度法

 

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义:

GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循 环的关键酶之一(通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH,有助于维 持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外 GR 还参与抗坏 血酸-谷胱甘肽循环途径。

测定原理:

GR 能催化 NADPH 还原 GSSG 再生 GSH,同时 NADPH 脱氢生成 NADP+;NADPH 在 340 nm 有特 征吸收峰,相反 NADP+在该波长无吸收峰;通过测定 340 nm 吸光度下降速率来测定 NADPH 脱氢 速率,从而计算 GR 活性。

 

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水

 

试剂组成和配置:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5.0 mL 蒸馏水,混匀。

试剂三:液体×1 支,4℃保存。

 

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 8000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

 

操作步骤:

1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂一置于 25℃(普通物质)或者 37℃(哺乳动物)中预热 30min。

3. 空白管:取 1mL 石英比色皿,加入 850μ L 试剂一,100μ L 试剂二,50μ L 试剂三,充分混 匀,于 340nm 处测定 10 s 和 190 s 吸光度,记为 A 空 1 和 A 空 2,△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。

4. 测定管:取 1mL 石英比色皿,加入 750μ L 试剂一,100μ L 试剂二,100μ L 上清液,50μ L 试剂三,充分混匀,于 340nm 测定 10 s 和 190 s 吸光度,记为 A 测 1 和 A 测 2,△A 测定管= A 测 1﹣A 测 2。

注意:空白管只需要测定一次。

 

计算公式: 

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。

GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反总×109 ]÷[Cpr×V 样]÷T = 536×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每克样本每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个 酶活单位。

GR 酶活(nmol/min/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反总×109 ] ÷(W×V 样÷V 样 总)÷T = 536×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

(3) 按细胞数量计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每 104个细胞每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。

GR 酶活(nmol/min/104 cell)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反总×109 ] ÷(细胞数 量×V 样÷V 样总)÷T = 536×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每毫升液体每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。

GR 酶活(nmol/min/mL)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反总×109 ]÷×V 样÷T = 536×(△A 测定管-△A 空白管)

ε :NADPH 摩尔消光系数 6.22×103 L/mol/cm;V 反总:反应体系总体积,1000μ L=0.001 L; 106:1 mol=1×106 μ mol; Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);V 样:加入反应体系中上清液体 积,100μ L =0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:反应时间,3 min。

 

注意事项:

(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,匀浆液避免反复冻融;

(2)试剂二须现配现用,配制完后,置于冰上,未使用完的 4℃保存,三天内使用完。

(3)测定前须先用 1~2 个样做预实验,确保 180s 内吸光值变化呈线性,哺乳动物组织一般 须用试剂一稀释 2~5 倍;

(4)细胞中 GR 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 GR 的提取时可加试剂 一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。

 

系列产品及单价

辅酶Ⅱ系列    
QS1100辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样550
MS1100辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒微量法100管/48样1000
QS1101NADP磷酸酶(NADPase)测试盒可见分光光度法50管/48样520
MS1101NADP磷酸酶(NADPase)测试盒微量法100管/96样980
QS11026-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒紫外分光光度法50管/48样160
MS11026-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒微量法100管/96样300
QS1103胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒紫外分光光度法50管/48样260
MS1103胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法100管/96样500
QS1104NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1104NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒微量法100管/96样600
QS1105NAD-苹果酸酶(NAD-ME)测试盒紫外分光光度法50管/48样350
MS1105NAD-苹果酸酶(NAD-ME)测试盒微量法100管/96样650
QS11066-磷酸葡糖糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样750
MS11066-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒微量法100管/96样1400
QS1107肌酸激酶(CK)测试盒紫外分光光度法50管/48样820
MS1107肌酸激酶(CK)测试盒微量法100管/96样1500
QS1108-10脂肪酸合成酶(FAS)测试盒紫外分光光度法10管/9样1200
QS1108-25脂肪酸合成酶(FAS)测试盒紫外分光光度法25管/24样2000
QS1108-50脂肪酸合成酶(FAS)测试盒紫外分光光度法50管/48样3200
MS1108脂肪酸合成酶(FAS)测试盒微量法100管/96样6000
QS2508蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒紫外分光光度法50管/48样1600
MS2508蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒微量法100管/96样3000
QS1110硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒可见分光光度法50管/48样250
MS1110硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒微量法100管/96样450
QS1111谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒紫外分光光度法50管/48样260
MS1111谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒微量法100管/96样500
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