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硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR) 活性测定试剂盒 技术文章
点击次数:531 发布时间:2019-06-06
  • 当前位置: 首页 > 生理生化试剂盒 > 常量分光光度计法 > 辅酶II系列 > 硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR) 活性测定试剂盒

product-view

硫氧还蛋白氧化还原酶(Thioredoxin Reductase, TrxR) 活性测定试剂盒

商品货号:QS1110
英文名称:Oxidized Thioredoxin Reductase (TrxR) Assay Kit
别名:硫氧还蛋白氧化还原酶试剂盒 TrxR Kit 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS1110-50管/48样索桥生物50管/48样¥250.00元 

 

  • 产品详细介绍

 

测定意义:

TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似,催化GSSG还原生成GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

测定原理:

TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+,TNB在412 nm有特征吸收峰,通过测定412nm波长处TNB的增加速率,即可计算TrxR活性。

 

  •  
  • 产品说明书

 

货号:QS1110                             规格:50 管/48 样

 

 硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR) 活性测定试剂盒说明书

                             可见分光光度法

 

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义:

TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化 还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与 GR 活性类似, 催化 GSSG 还原生成 GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

测定原理:

TrxR 催化 NADPH 还原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率,即可计算 TrxR 活性。

 

自备实验用品及仪器: 可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体 90mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5 mL 蒸馏水溶解。

 

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

 

TrxR 测定操作:

1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂一在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)预热 30min。

3. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100μ L 试剂二,100μ L 试剂三,700μ L 试剂一,100μ L 上清液,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 和 310 s 吸光度,记为 A3 和 A4。△A 测定管=A2-A1。

 

TrxR 活性计算公式:

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

TrxR(nmol/min /mg prot)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T = 147×△A 测定管÷Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样本每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

TrxR(nmol/min /g 鲜重)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 147×△A 测定管÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 104个细胞每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单 位。

TrxR(nmol/min/104 cell)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 147×△A 测定管÷ 细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

TrxR(nmol/min /mL)=△A 测定管÷ε ÷d×V 反总÷V 样÷T = 147×△A 测定管

ε :TNB 在 412nm 处的微摩尔消光系数,0.0136 L/μ mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总: 反应体系总体积(L),1000μ L=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定; V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μ L=0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W, 样本质量,g;T:反应时间(min),5 min。

注意事项:

1. 测定前须先取 1~2 个样做预实验,哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时,一般须用 蒸馏水稀释 5 倍左右;测定过程操作须迅速。

2. 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。

 

系列产品及单价

辅酶Ⅱ系列    
QS1100辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒可见分光光度法50管/24样550
MS1100辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒微量法100管/48样1000
QS1101NADP磷酸酶(NADPase)测试盒可见分光光度法50管/48样520
MS1101NADP磷酸酶(NADPase)测试盒微量法100管/96样980
QS11026-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒紫外分光光度法50管/48样160
MS11026-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒微量法100管/96样300
QS1103胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒紫外分光光度法50管/48样260
MS1103胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒微量法100管/96样500
QS1104NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒紫外分光光度法50管/48样320
MS1104NADP苹果酸酶(NADP-ME)测试盒微量法100管/96样600
QS1105NAD-苹果酸酶(NAD-ME)测试盒紫外分光光度法50管/48样350
MS1105NAD-苹果酸酶(NAD-ME)测试盒微量法100管/96样650
QS11066-磷酸葡糖糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒紫外分光光度法50管/48样750
MS11066-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒微量法100管/96样1400
QS1107肌酸激酶(CK)测试盒紫外分光光度法50管/48样820
MS1107肌酸激酶(CK)测试盒微量法100管/96样1500
QS1108-10脂肪酸合成酶(FAS)测试盒紫外分光光度法10管/9样1200
QS1108-25脂肪酸合成酶(FAS)测试盒紫外分光光度法25管/24样2000
QS1108-50脂肪酸合成酶(FAS)测试盒紫外分光光度法50管/48样3200
MS1108脂肪酸合成酶(FAS)测试盒微量法100管/96样6000
QS2508蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒紫外分光光度法50管/48样1600
MS2508蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒微量法100管/96样3000
QS1110硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒可见分光光度法50管/48样250
MS1110硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒微量法100管/96样450
QS1111谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒紫外分光光度法50管/48样260
MS1111谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒微量法100管/96样500
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