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乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒 说明 技术文章

发表时间:2019-06-10  |  点击率:1160
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乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AchE)试剂盒

商品货号:QS2000
英文名称:Acetylcholinesterase(AchE) Assay Kit
别名:乙酰胆碱酯酶试剂盒 AchE Kit 乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒 乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒
检测方法:常量法

 

商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
QS2000-50管/48样索桥生物50管/48样¥200.00元 

 

  • 产品详细介绍
  •  
  • 产品说明书

 

测定意义:

AchE属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。

测定原理:

AchE催化Ach水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm处有吸收峰,通过测定412 nm吸光度增加速率,计算AchE活性。

 

货号: QS2000         规格:50管/48样

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)试剂盒说明书

        可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

AchE 属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach) 水解,在神经传导调节中起重要作用。

测定原理:

AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯 甲酸(TNB);TNB 在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412 nm 吸光度增加速率,计算 AchE 活性。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 2.6mL 试剂一,充分震荡溶解。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 2.6mL 试剂一,充分震荡溶解。

粗酶液提取:

1. 组织:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。

2. 细菌、真菌:

按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

测定操作:

1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。

3. 取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100μ L 上清液、800 μ L 试剂一、50μ L 试剂二和 50 μ L 试 剂三,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光 值记为 A2。△A 测定管=A2-A1。

注意:空白管只需测定一次。

AchE 活性计算公式:

1. 组织 AchE 活性

(1)按照蛋白浓度计算 活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε ÷d×V 反总×109 )÷(Cpr ×V 样)÷T = 245×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε ÷d×V 反总×109 )÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 245×△A÷W

2. 细菌、细胞 AchE 活性

活性单位定义:每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε ÷d×V 反总×109 )÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 245×△A÷细胞数量

3. 血清 AchE 活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε ÷d×V 反总×109 )÷V 样÷T =245×△A

ε :TNB 摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;V 反总:反应体系总体积(L),1 mL=0.001 L; 106:1mol=1×106 μ mol;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W:样本 质量,g;V 样:加入上清液体积(mL),0.1 mL;T:反应时间(min),3 min。

 

系列产品及单价

酯酶系列    
QS2000乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒可见分光光度法50管/48样200
MS2000乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒微量法100管/96样380
QS2001组织及血液酸性磷酸酶(ACP)测试盒可见分光光度法50管/24样160
MS2001酸性磷酸酶(ACP)测试盒微量法100管/48样310
QS2002组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒可见分光光度法50管/24样160
MS2002碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒微量法100管/48样310
QS2003羧酸酯酶(CarE)测试盒可见分光光度法50管/48样300
MS2003羧酸酯酶(CarE)测试盒微量法100管/96样590

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