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细胞从培养皿上的解离

发表时间:2010-01-18  |  点击率:1315

细胞从培养皿上的解离
以下通用步骤可以在保持细胞完整性的同时从培养器皿中分离多
种细胞系。但这一步骤不能广泛适用于所有细胞系。应通过实验
来确定不同体系所需的佳条件和浓度。
・在传代培养时监测细胞存活率。
・细胞存活率应大于90%。
・对于无血清培养基,建议降低胰酶用量。
1.去除器皿中原有细胞培养基。
2.用不含钙镁的平衡盐溶液或EDTA清洗细胞。将清洗溶液加到培 
养瓶中与细胞相对的一侧。摇动培养瓶1-2分钟以冲洗细胞
层,然后倒掉清洗溶液。
3.在培养瓶中与细胞相对的一侧以2-3ml/25cm2的比例加入选 
 定的解离溶液(见下表)。确保解离溶液能够覆盖整个细胞层。 
在37℃下孵育培养瓶。并轻轻摇动。通常细胞在5-15分钟内解
 离。不同细胞系的解离时间有所不同。仔细观测解离过程,以免
损伤细胞。对于难从基质上解离下来的细胞系,可以轻敲培养
瓶 以加快解离过程。
4.当细胞完全解离时,竖直放置培养瓶使细胞流向培养瓶底部。
向培养瓶中加入完全培养基。反复吹吸单层表面以分散细胞。计
 算细胞个数,然后传代培养细胞。
 注意:如果使用无血清培养基,应加入大豆胰酶抑制剂。对于
0.25mg/ml的胰酶抑制剂,一般按1:1(体积比)的比例加入即可
抑制胰酶。

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