细胞从培养皿上的解离

细胞从培养皿上的解离
以下通用步骤可以在保持细胞完整性的同时从培养器皿中分离多
种细胞系。但这一步骤不能广泛适用于所有细胞系。应通过实验
来确定不同体系所需的佳条件和浓度。
・在传代培养时监测细胞存活率。
・细胞存活率应大于90%。
・对于无血清培养基，建议降低胰酶用量。
1．去除器皿中原有细胞培养基。
2．用不含钙镁的平衡盐溶液或EDTA清洗细胞。将清洗溶液加到培　
养瓶中与细胞相对的一侧。摇动培养瓶1-2分钟以冲洗细胞
层，然后倒掉清洗溶液。
3．在培养瓶中与细胞相对的一侧以2-3ml/25cm2的比例加入选　
　定的解离溶液（见下表）。确保解离溶液能够覆盖整个细胞层。　
在37℃下孵育培养瓶。并轻轻摇动。通常细胞在5-15分钟内解
　离。不同细胞系的解离时间有所不同。仔细观测解离过程，以免
损伤细胞。对于难从基质上解离下来的细胞系，可以轻敲培养
瓶 以加快解离过程。
4．当细胞*解离时，竖直放置培养瓶使细胞流向培养瓶底部。
向培养瓶中加入*培养基。反复吹吸单层表面以分散细胞。计
　算细胞个数，然后传代培养细胞。
　注意：如果使用无血清培养基，应加入大豆胰酶抑制剂。对于
0.25mg/ml的胰酶抑制剂，一般按1：1（体积比）的比例加入即可
抑制胰酶。